HBXIP調(diào)節(jié)癌基因Src表達參與乳腺癌細胞遷移.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、HBXIP(hepatitis B X-interacting protein),作為本實驗室重點研究的核心蛋白,全稱為乙肝病毒X蛋白相關(guān)蛋白,最初因其可以特異性地與乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus x protein,HBx)的羧基端結(jié)合而得名,含有173個氨基酸,分子量約為18KD。本實驗室的前期研究發(fā)現(xiàn)HBXIP是一個重要的癌蛋白在乳腺癌的增殖和遷移過程中發(fā)揮著重要作用,但調(diào)控分子機制有待進一步研究。Src作為S

2、FKs(Src家族激酶)中的一員,是研究最為廣泛的非受體型酪氨酸蛋白激酶,其參與細胞的多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,在細胞的增殖、分化等生理過程中發(fā)揮重要功能。Src的表達或活性異常往往能夠引起前列腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌和乳腺癌等腫瘤。本研究初步探討了HBXIP和Src在乳腺癌細胞中的作用及其在乳腺癌細胞和組織中的相關(guān)性,并深入研究了HBXIP對Src表達和啟動子活性的影響,主要研究結(jié)果如下:
  本研究采用免疫組化、RT-PCR和Wester

3、n blot等分子生物學(xué)方法,檢測了HBXIP與Src在臨床乳腺癌組織樣本及其不同乳腺癌細胞中的相關(guān)性。首先,我們用含87例原位乳腺癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織樣本和11例正常乳腺組織的組織芯片,通過免疫組化實驗分別檢測了其中HBXIP和Src的表達水平,檢測發(fā)現(xiàn)HBXIP與Src的表達具有顯著正相關(guān)性。實驗室前期的研究結(jié)果顯示,HBXIP在原位乳腺癌組織和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中陽性表達率分別高達77.6%(38/49)和94.7%(36/38);

4、本研究利用來源于同一組織包埋蠟塊的切片對Src的表達進行了檢測,結(jié)果顯示,在HBXIP陽性的原位乳腺癌組織及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中Src的陽性率分別為78.9%(30/38)和89%(32/36),且在HBXIP陰性組織中Src也呈現(xiàn)陰性;此外,在11例乳腺正常組織中,HBXIP和Src幾乎不表達。然后,我們應(yīng)用Western blot和RT-PCR實驗檢測了不同遷移能力的乳腺癌細胞系中HBXIP和Src的表達情況,結(jié)果表明,HBXIP和S

5、rc的表達水平與乳腺癌細胞遷移能力呈現(xiàn)明顯正相關(guān)性。因此,我們推測,HBXIP和Src兩者之間可能存在一定的調(diào)節(jié)作用。于是,我們在乳腺癌細胞中過表達不同劑量的HBXIP,RT-PCR和Western blot實驗表明HBXIP在mRNA和蛋白水平都能夠以劑量依賴的方式上調(diào)Src的表達,相反,干擾HBXIP后Src的表達明顯下調(diào)。本實驗室前期的研究發(fā)現(xiàn)HBXIP可以作為轉(zhuǎn)錄輔激活因子調(diào)控一些關(guān)鍵癌基因的表達,因此,我們推測HBXIP可能具

6、有轉(zhuǎn)錄激活Src啟動子的活性上調(diào)其表達。接下來,染色質(zhì)免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation,ChIP)實驗表明,HBXIP能夠結(jié)合Src啟動子。為進一步研究HBXIP上調(diào)Src表達的分子機制,我們克隆了Src啟動子。雙熒光素酶報告基因檢測發(fā)現(xiàn),在MCF-7細胞中過表達HBXIP能顯著增強Src啟動子活性。
  綜上所述,我們發(fā)現(xiàn)HBXIP和Src在臨床乳腺癌組織和乳腺癌細胞中的表達存在明顯的正相關(guān)

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