脂肪酸合成酶促進乳腺癌細胞增殖相關(guān)信號傳導(dǎo)途徑的研究.pdf

1、乳腺癌轉(zhuǎn)移是造成病患死亡的主要原因之一。有關(guān)高轉(zhuǎn)移傾向的乳腺癌細胞保持其高轉(zhuǎn)移高增殖能力的機制尚不清楚，有報道稱，脂肪酸合成酶(FAS)在腫瘤細胞的增殖中起到了很重要的作用，但其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制尚不明了。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)，花生四烯酸的代謝產(chǎn)物可激活Gi/o/PLC/PKC/p-ERK1/2，并形成正反饋環(huán)路，進一步激活p-ERK1/2的下游信號分子，從而促進乳腺癌細胞的高增殖和遷移。本文對脂肪酸合成酶促進乳腺癌細胞增殖的信號通路及其與已

2、發(fā)現(xiàn)正反饋環(huán)路的關(guān)系進行了研究。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　 ⑴應(yīng)用報告基因的方法對MCF－7與LM－MCF－7細胞之間脂肪酸合成酶的轉(zhuǎn)錄活性差異進行了檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高轉(zhuǎn)移能力乳腺癌細胞系LM－MCF－7中的FAS的轉(zhuǎn)錄活性明顯高于低轉(zhuǎn)移乳腺癌細胞系MCF－7。
　　 ⑵根據(jù)實驗室前期發(fā)現(xiàn)的p-ERK1/2/arachidonic acid代謝產(chǎn)物/Gi/PLC/PKC/p-ERK1/2正反饋環(huán)路維持了乳腺癌細胞的增

3、殖。我們應(yīng)用報告基因?qū)嶒?，分別檢測了COX、LOX、P450、G蛋白和酪氨酸的抑制劑Indomethacin(Indo)、NDGA、SKF525A、PTX和AG112對LM-MCF－7細胞中FAS轉(zhuǎn)錄水平的影響。結(jié)果顯示，在LM-MCF－7細胞中，脂肪酸合成酶的轉(zhuǎn)錄活性可被脂氧化酶LOX抑制劑NDGA以時間依賴和濃度依賴的方式抑制。絲裂原活化蛋白激酶ERK抑制劑PD98059也同樣有抑制效果。但是，環(huán)氧化酶COX抑制劑INDO，細胞色素

4、P450抑制劑SKF，G蛋白抑制劑PTX和酪氨酸激酶抑制劑AG112無抑制效果。上述結(jié)果表明，脂肪酸合成酶轉(zhuǎn)錄活性的增加與ERK及LOX的信號有關(guān)。
　　 ⑶在發(fā)現(xiàn)高轉(zhuǎn)移能力乳腺癌LM-MCF－7細胞中的脂肪酸合成酶轉(zhuǎn)錄活性上調(diào)與p-ERK1/2和LOX有關(guān)的基礎(chǔ)上，我們進一步檢測了高低轉(zhuǎn)移細胞系中p-ERK1/2和LOX的表達水平。通過蛋白免疫印跡實驗，我們發(fā)現(xiàn)高轉(zhuǎn)移能力乳腺癌LM-MCF－7細胞中的ERK磷酸化水平明顯高于M

5、CF－7細胞；RT-PCR、蛋白免疫印跡和免疫組化結(jié)果都顯示，LM—MCF-7細胞中的5－LOX和12R－LOX表達水平也明顯高于MCF－7細胞。
　　 ⑷為了進一步確定p-ERK1/2、LOX和FAS的相互關(guān)系，在LM－MCF－7細胞中加入FAS抑制劑Cerulenin之后，發(fā)現(xiàn)p-ERK1/2和5－LOX表達水平被明顯下調(diào)，而12R-LOX沒有受到影響；p-ERK1/2的抑制劑PD98059可明顯下調(diào)5－LOX的表高達水平。

6、結(jié)果表明，LM－MCF－7細胞中FAS通過激活ERK的活性上調(diào)了5－LOX的表達。
　　 ⑸由此推測，AA經(jīng)5－LOX作用的代謝產(chǎn)物可以提高FAS的轉(zhuǎn)錄活性。為了驗證這一假設(shè)，在LM-MCF－7細胞中，加入5－LOX特異性抑制劑。MK－886，報告基因和RT-PCR結(jié)果顯示，F(xiàn)AS轉(zhuǎn)錄活性被抑制，ELISA實驗結(jié)果顯示，5-LOX作用于AA的代謝產(chǎn)物L(fēng)TB4在LM-MCF－7細胞培養(yǎng)液中的含量下降。在MCF-7細胞中，外源性的L

7、TB4可以以時間依賴和濃度依賴的方式增強FAS的轉(zhuǎn)錄活性、提高ERK的磷酸化水平和5－LOX的表達水平。我們又通過報告基因?qū)嶒灆z測發(fā)現(xiàn)，MCF-7細胞中加入LM－MCF-7細胞條件培養(yǎng)液，可以提高其FAS的轉(zhuǎn)錄活性。
　　 ⑹應(yīng)用BrdU摻入實驗檢測了上述信號通路的功能。結(jié)果顯示，ERK抑制劑PD98059、5-LOX抑制劑MK－886和FAS抑制劑Cerulenin分別均可抑制LM－MCF－7細胞的增殖，而LTB4能夠促進MC