化療藥物誘導肝癌細胞凋亡對熱休克蛋白表達的影響.pdf

1、研究目的：通過建立肝癌細胞化療藥物敏感性檢測方法，探索不同敏感度化療藥物誘導肝癌細胞株BEL-7402凋亡的作用，以及對免疫刺激“危險信號”熱休克蛋白HSP70表達的影響，為建立肝癌的化學免疫治療新方法提供理論與實驗依據(jù)。 研究方法：以人肝癌細胞株BEL-7402為研究對象。通過Hoechst33342染色和熒光顯微鏡觀察化療藥物誘導BEL-7402細胞凋亡后的形態(tài)學變化；分別以MTT比色法和三磷酸腺苷生物發(fā)光法(ATP-TCA

2、)檢測BEL-7402細胞對不同化療藥物的敏感性，采用流式細胞術方法檢測細胞凋亡；利用直接免疫熒光標記與流式細胞術方法檢測不同敏感度化療藥物作用下BEL-7402細胞HSP70表達的情況。 實驗結果：1.形態(tài)學觀察結果化療藥物可以引起肝癌細胞株BEL-7402凋亡的典型形態(tài)學變化，以藥物處理48h時最為明顯。 2.MTT法檢測化療藥物對細胞的抑制作用對肝癌細胞株BEL-7402抑制作用較強的藥物是足葉乙甙、表阿霉素、泰素

3、等藥物，抑制作用較弱的藥物是5-FU、絲裂霉素、卡鉑等藥物。足葉乙甙、表阿霉素、泰素、健擇、長春新堿、草酸鉑六種藥物在三種不同濃度下對肝癌細胞株BEL-7402的抑制率均高于順鉑、5FU、絲裂霉素、卡鉑四種藥物，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 3.ATP-TCA法檢測肝癌細胞株BEL-7402對化療藥物的敏感性肝癌細胞株BEL-7402敏感的藥物為：足葉乙甙、表阿霉素；中度敏感的藥物為：健擇、長春新堿；耐藥的藥物為：絲裂霉素

4、、卡鉑。藥敏檢測結果與MTT檢測結果相符合。 4.流式細胞儀檢測化療藥物誘導的肝癌細胞凋亡敏感組藥物(足葉乙甙、表阿霉素)誘導肝癌細胞株BEL-7402的凋亡比率顯著高于中度敏感組(健擇、長春新堿)與耐藥組(絲裂霉素、卡鉑)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。敏感組、中度敏感組、耐藥組藥物誘導肝癌細胞株BEL-7402的凋亡比率顯著高于對照組(P＜0.05)。 5.免疫熒光與流式細胞術檢測肝癌細胞株BEL-7402HSP

5、70表達情況直接免疫熒光標記結果顯示，熱休克組與敏感組肝癌細胞株BEL-7402熒光強度強于耐藥組(絲裂霉素、卡鉑)與對照組；耐藥組肝癌細胞株BEL-7402熒光強度與對照組差別不大。 FCM檢測結果顯示，敏感組肝癌細胞HSP70表達高于耐藥組與對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；且足葉乙甙誘導肝癌細胞HSP70表達顯著高于熱休克組(P＜0.05)；耐藥組、對照組間HSP70表達差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

6、結論：綜合上述實驗結果，可以得出以下結論：1.MTT比色法可以很好的應用于化療藥物對肝癌細胞株BEL-7402抑制作用的評價，與ATP-TCA法有很好的一致性。 2.化療藥物可以有效誘導肝癌細胞株BEL-7402細胞凋亡。敏感組藥物對肝癌細胞株BEL-7402凋亡的誘導作用顯著強于中度敏感組與耐藥組藥物。肝癌細胞對化療藥物的敏感性與細胞凋亡密切相關。 3.本課題首次研究并發(fā)現(xiàn)化療藥物可以有效誘導肝癌細胞株BEL-7402