Nimesulide聯(lián)合鉑類化療藥物對人肝癌細胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、目的：探討選擇性環(huán)氧合酶-2（COX-2）抑制劑Nimesulide對人肝癌細胞株SMMC-7721生長抑制和誘導凋亡的作用，并對其機制做進一步探討：及聯(lián)合順鉑（Cisplatin、DDP）或奧沙利鉑（Oxaliplatin、L-OHP）的協(xié)同作用。 方法： 1.人肝癌細胞株SMMC-7721用含不同濃度（0，25，50，100，200，400μmol/L）Nimesulide的培養(yǎng)基培養(yǎng)24、48、72h。采用倒置顯微

2、鏡觀察細胞形態(tài)學改變，四氮唑鹽比色法（MTT法）觀察細胞增殖活力的改變，流式細胞儀檢測細胞凋亡率；免疫組化法檢測SMMC-7721細胞中Bcl-2、Cox-2、Bax蛋白表達的變化；用ELISA法檢測細胞培養(yǎng)液上清中PGE2的變化；篩選一個濃度做聯(lián)合用藥實驗。 2.人肝癌細胞株SMMC-7721用含不同濃度DDP或L-OHP（0.5、1.0、2.0、4.0mg/L）、及聯(lián)合含Nimesulide的培養(yǎng)基培養(yǎng)48h，采用倒置顯微鏡

3、觀察細胞形態(tài)學改變，四氮唑鹽比色法（MTT法）觀察細胞增殖活力的改變，流式細胞儀檢測細胞凋亡率。 結(jié)果： 1.Nimesulide對人肝癌細胞株SMMC-7721有生長抑制作用，并呈劑量和時間依賴性。流式細胞儀檢測分析發(fā)現(xiàn)Nimesulide可有效誘導SMMC-7721細胞的凋亡。免疫細胞化學結(jié)果顯示，對照組細胞胞漿內(nèi)可見大量棕黃色顆粒，染色較深，提示Bcl-2和COX-2蛋白高表達，Nimesulide濃度逐漸增加處理

4、48h后觀察，細胞形態(tài)不規(guī)則，表達棕黃色顆粒的細胞數(shù)逐漸減少，并且染色也逐漸變淡，提示在Nimesulide作用下，Bcl-2和COX-2蛋白的表達逐漸下降，而Bax蛋白表達隨著作用藥物濃度增加，產(chǎn)生棕黃色顆粒的陽性細胞逐漸增多；隨著Nimesulide濃度的增加，PGE2的釋放量明顯下降，與對照組比較有顯著差異P（<0.05），提示COX-2活性受到抑制。Nimesulide濃度為50μmol/L可顯著抑制SMMC-7721細胞的增殖

5、，選用該濃度做聯(lián)合用藥實驗。 2.DDP或L-OHP（0.5、1.0、2.0、4.0mg/L）對人肝癌細胞株SMMC-7721有生長抑制作用，并呈劑量依賴性；并且L-OHP抑制作用較DDP強。Nimesulide50μmol/L與DDP或L-OHP聯(lián)合使用時，聯(lián)合抑制作用呈現(xiàn)協(xié)同作用（q>1.15）。流式細胞儀檢測分析發(fā)現(xiàn)兩種鉑類藥物均可有效誘導SMMC-7721細胞的凋亡，且與Nimesulide聯(lián)合時誘導效應(yīng)增強。