肝癌化學(xué)免疫治療系列研究Ⅱ-化療藥物誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡促進(jìn)細(xì)胞膜熱休克蛋白表達(dá).pdf

1、研究目的 研究不同敏感性化療藥物誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞株HepG2凋亡對(duì)熱休克蛋白HSP70、gp96表達(dá)的影響。為臨床肝癌的化學(xué)一免疫治療方案和腫瘤個(gè)體化療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法 MTT比色法、ATP-TCA化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)不同化療藥物對(duì)人源性肝癌細(xì)胞株HepG2生長(zhǎng)的抑制作用，篩選出敏感和耐藥藥物。分別用敏感和耐藥藥物作用于HepG2，直接免疫熒光、流式細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞胞漿和胞膜熱休克蛋白(HSP70、gp96

2、)的表達(dá)差異和表達(dá)趨勢(shì)，Annexin V法檢測(cè)凋亡。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論 1．MTT、ATP-TCA兩種方法檢測(cè)肝癌細(xì)胞株HepG2的化療藥物敏感性有較好的一致性， HepG2敏感的化療藥有表阿霉素、足葉乙甙等；耐藥藥物有卡鉑、絲裂霉素等。 2．肝癌細(xì)胞株HepG2胞漿高表達(dá)熱休克蛋白HSP70和gp96，胞膜表達(dá)弱于胞漿：敏感、耐藥藥物作用于HepG2誘導(dǎo)凋亡的同時(shí)胞漿HSP70和gp96表達(dá)下調(diào)，胞膜表達(dá)上調(diào)，呈現(xiàn)胞

3、漿向胞膜轉(zhuǎn)移趨勢(shì)。 3．敏感藥物誘導(dǎo)HepG2凋亡以及HSP70和gp96由胞漿向胞膜轉(zhuǎn)移所用時(shí)間較耐藥藥物大為縮短；耐藥藥物在體外誘導(dǎo)膜gp96表達(dá)的水平遠(yuǎn)較敏感藥物高。 4．化療藥物通過(guò)誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞胞膜HSP70/gp96表達(dá)上調(diào)而可能增加腫瘤細(xì)胞的免疫原性。體內(nèi)治療方面由于有效藥物濃度維持的時(shí)間短，敏感藥物較之耐藥藥物可能有更大優(yōu)勢(shì)；體外DCs腫瘤疫苗制備方面由于耐藥藥物在持續(xù)長(zhǎng)時(shí)間作用后能更大程度上調(diào)膜gp