鐵螯合對(duì)白血病細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)及凋亡酶的影響.pdf

1、四川大學(xué)博士學(xué)位論文鐵螯合對(duì)白血病細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)及凋亡酶的影響姓名：賈國(guó)存申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：兒科學(xué)（小兒血液腫瘤）指導(dǎo)教師：廖清奎李強(qiáng)20040406方法:將K562及HL60細(xì)胞置于10%(VN)滅活精制小牛血清的RPMI164。培養(yǎng)基中，370C5%C仇孵箱中培養(yǎng)，每2^3天傳代一次，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，觀察不同濃度去鐵胺對(duì)K562及HL60細(xì)胞的作用。實(shí)驗(yàn)分為去鐵胺組、去鐵胺十三氯化鐵組及空白對(duì)照組。用鈣黃綠素(

2、calcein)檢測(cè)K562及HL60細(xì)胞LIP改變。錐蟲藍(lán)天活細(xì)胞拒染實(shí)驗(yàn)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞存活率測(cè)定光鏡形態(tài)學(xué)觀察及流式細(xì)胞儀(flowcytometerFCM)等方法檢測(cè)HL60細(xì)胞凋亡RTPCR測(cè)定HL60細(xì)胞及K562cmycrb、bax及p21mRNA表達(dá)比色法檢測(cè)caspase3活性、Westernblot檢測(cè)caspase3蛋白表達(dá)。結(jié)果:(1)不同濃度的DFO作用于K562及HL60細(xì)胞后，隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)及DFO濃度

3、的增加，LIP降低，細(xì)胞生存率逐漸下降，顯示一定的時(shí)間劑量依賴性。(2)不同濃度的DFO作用于K562及HL60細(xì)胞一定時(shí)間后，細(xì)胞凋亡增加，高于對(duì)照組〔p0.05)。流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞周期分析顯示凋亡主要發(fā)生在GINS期。(3)DFO作用于細(xì)胞后，RTPCR結(jié)果顯示，cmycrb、baxp21mRNA表達(dá)升高均高于對(duì)照組，0.05).(4)caspase3活性升高。(5)相關(guān)分析顯示，細(xì)胞LIP下降與。mycrb、bax.p21mRNA