鐵螯合對白血病細胞凋亡相關基因表達及凋亡酶的影響.pdf

1、四川大學博士學位論文鐵螯合對白血病細胞凋亡相關基因表達及凋亡酶的影響姓名：賈國存申請學位級別：博士專業(yè)：兒科學（小兒血液腫瘤）指導教師：廖清奎李強20040406方法:將K562及HL60細胞置于10%(VN)滅活精制小牛血清的RPMI164。培養(yǎng)基中，370C5%C仇孵箱中培養(yǎng)，每2^3天傳代一次，取對數(shù)生長期細胞進行實驗，觀察不同濃度去鐵胺對K562及HL60細胞的作用。實驗分為去鐵胺組、去鐵胺十三氯化鐵組及空白對照組。用鈣黃綠素(

2、calcein)檢測K562及HL60細胞LIP改變。錐蟲藍天活細胞拒染實驗進行活細胞計數(shù)及細胞存活率測定光鏡形態(tài)學觀察及流式細胞儀(flowcytometerFCM)等方法檢測HL60細胞凋亡RTPCR測定HL60細胞及K562cmycrb、bax及p21mRNA表達比色法檢測caspase3活性、Westernblot檢測caspase3蛋白表達。結果:(1)不同濃度的DFO作用于K562及HL60細胞后，隨培養(yǎng)時間延長及DFO濃度

3、的增加，LIP降低，細胞生存率逐漸下降，顯示一定的時間劑量依賴性。(2)不同濃度的DFO作用于K562及HL60細胞一定時間后，細胞凋亡增加，高于對照組〔p0.05)。流式細胞儀對細胞周期分析顯示凋亡主要發(fā)生在GINS期。(3)DFO作用于細胞后，RTPCR結果顯示，cmycrb、baxp21mRNA表達升高均高于對照組，0.05).(4)caspase3活性升高。(5)相關分析顯示，細胞LIP下降與。mycrb、bax.p21mRNA