胃癌SGC-7901細(xì)胞株側(cè)群細(xì)胞分選及生物學(xué)特性的初步研究.pdf

1、目的:分選人胃癌SGC-7901細(xì)胞株中的側(cè)群(side population，SP)細(xì)胞并初步研究其相關(guān)生物學(xué)特性。
　　方法:以人胃癌細(xì)胞株SGC-7901為研究對(duì)象，通過(guò)熒光染料Hoechst33342進(jìn)行細(xì)胞染色，對(duì)照組同時(shí)加入維拉帕米做拮抗對(duì)照，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)并分選SP細(xì)胞和nonSP細(xì)胞。CCK-8法觀察兩組細(xì)胞的體外增殖活性;無(wú)血清并添加生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)基培養(yǎng)以觀察兩組細(xì)胞的自我更新能力;兩組細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)1周后復(fù)測(cè)

2、SP細(xì)胞比例以觀察不對(duì)稱分裂能力;體外耐藥實(shí)驗(yàn)觀察兩組細(xì)胞對(duì)化療藥物5-FU的耐藥性;western-blot檢測(cè)ABCG2蛋白和bcl-2蛋白表達(dá)情況;熒光定量PCR檢測(cè)干細(xì)胞相關(guān)基因Musashi-1 mRNA和CD44mRNA在兩組細(xì)胞中的表達(dá)差異;異種移植實(shí)驗(yàn)觀察兩組細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的成瘤能力。
　　結(jié)果:胃癌SGC-7901細(xì)胞株中SP細(xì)胞的比例大致在2.3±0.78％左右，相對(duì)于nonSP細(xì)胞，SP細(xì)胞具有較強(qiáng)的體外增殖

3、活性(P＜0.05);在無(wú)血清培養(yǎng)基中能形成明顯的腫瘤球;具有較強(qiáng)的不對(duì)稱分裂能力;對(duì)5-FU的耐藥存活率明顯高于nonSP細(xì)胞(P＜0.05);高表達(dá)耐藥蛋白ABCG2和抗凋亡蛋白bcl-2;SP細(xì)胞中干細(xì)胞相關(guān)基因Musashi-1 mRNA和CD44mRNA的相對(duì)表達(dá)量明顯高于nonSP細(xì)胞(P＜0.05);在裸鼠皮下種植2×103個(gè)SP細(xì)胞可以產(chǎn)生腫瘤，而皮下種植2×104個(gè)nonSP細(xì)胞也未能見(jiàn)到腫瘤形成。
　　結(jié)論:人