Mφ1和Mφ2對γδT 細(xì)胞抗胃癌細(xì)胞株SGC-7901作用的研究.pdf

1、目的： 探討經(jīng)典激活的巨噬細(xì)胞（Mφ1）和選擇性激活的巨噬細(xì)胞（Mφ2）培養(yǎng)上清液對人γδT細(xì)胞增殖、表面標(biāo)志、殺瘤活性的影響及其作用機(jī)制。
　　 方法： 用粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)和γ干擾素(IFN-γ)誘導(dǎo)培養(yǎng)Mφ1,用巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）培養(yǎng)產(chǎn)生Mφ2,用含已戊烯焦磷酸(IPP)和白細(xì)胞介素-2(IL-2)的RPMI1640完全培養(yǎng)基擴(kuò)增人外周血γδT細(xì)胞。用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測巨噬細(xì)

2、胞的表面標(biāo)志CD68及γδT細(xì)胞表面標(biāo)志γδTCR、粘附分子CD44的表達(dá)。用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測2種巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-10、IL-12含量，以四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清對γδT細(xì)胞增殖的影響。用乳酸脫氫酶（LDH）釋放法檢測γδT細(xì)胞的殺瘤活性。
　　 結(jié)果：
　　 1.Mφ1和Mφ2經(jīng)培養(yǎng)后可高表達(dá)CD68，分別為73.2 ％和61.8 ％；
　　 2. 培養(yǎng)第6天時(shí)M

3、φ2分泌IL-10的水平開始升高，Mφ1分泌的IL-12的水平開始升高，8-12天達(dá)到峰值,14天時(shí)分泌量下降，在相同培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)，Mφ1與Mφ2 IL-10 IL-12分泌水平比較有顯著差異(P<0.01)。
　　 3. MTT法檢測結(jié)果顯示，不同濃度Mφ1上清組對γδT細(xì)胞的增值率均顯著高于對照組或Mφ2組(P<0.01) ，體積比在1：8時(shí)γδT細(xì)胞增殖率達(dá)峰值(338％)，Mφ2每一濃度組γδT細(xì)胞增值率均為負(fù)值，與Mφ1

4、組比較，均有顯著性差異（p＜0.01），但與對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).4.巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清液對γδT細(xì)胞表面標(biāo)志的影響：Mφ1培養(yǎng)上清作用后的γδΤ細(xì)胞(由MTT結(jié)果得出當(dāng)Mφ1培養(yǎng)上清：1640培養(yǎng)基的比為1：8時(shí)誘導(dǎo)作用最好，故我們選擇1：8)表面標(biāo)志γδTCR表達(dá)率為97.3％，明顯高于Mφ2組(89.1％)和對照組(91.27％)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。5.與Mφ1，Mφ2培養(yǎng)上清液共培養(yǎng)的γδT細(xì)胞殺傷腫

5、瘤細(xì)胞活性結(jié)果：不同濃度Mφ1上清組γδT細(xì)胞的殺瘤活性均高于對照組或Mφ2組(P<0.01)。在Mφ1上清：1640培養(yǎng)基體積比從1：4至1：16比例組，隨Mφ1培養(yǎng)上清液濃度的減少，γδT細(xì)胞的殺瘤活性逐漸升高，濃度在1：16時(shí)γδT細(xì)胞殺瘤活性達(dá)峰值(70.18％)，當(dāng)Mφ1上清:1640培養(yǎng)基體積比至1：32時(shí)，γδT細(xì)胞增殖率下降。Mφ2 每一濃度組γδT細(xì)胞殺瘤活性無明顯變化，與Mφ1組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05），但