17-DMAG對體外培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901增殖及凋亡的影響.pdf

1、胃癌是我國常見的消化道惡性腫瘤,而現(xiàn)有的治療手段不盡如人意,尤其是晚期和術(shù)后復(fù)發(fā)的胃癌治療困難。傳統(tǒng)的常規(guī)化療著眼于細(xì)胞毒性殺傷作用,對正常細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的選擇性差,不良反應(yīng)嚴(yán)重,并且腫瘤細(xì)胞容易產(chǎn)生耐藥,從而使治療失敗。因此,尋找新的治療藥物成為當(dāng)務(wù)之急。近年來,腫瘤的分子治療成為研究的熱點(diǎn)。熱休克蛋白90(heat shock protein90,HSP90)作為分子伴侶,在保護(hù)蛋白質(zhì)正確的空間結(jié)構(gòu)、防止其意外降解和保護(hù)細(xì)胞蛋白功能

2、方面有著重要意義。HSP90的主要作用是結(jié)合已獲得三級結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì),參與這些蛋白的激活和成熟過程。腫瘤的發(fā)生是由于癌基因與抑癌基因之間失衡,腫瘤細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)失衡,導(dǎo)致癌蛋白的過度表達(dá),引起細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。HSP90在多種腫瘤組織中表達(dá)增高,與細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的信號蛋白相互作用,維持這些蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能,其在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用,目前已成為抗腫瘤研究的熱門靶點(diǎn)。格爾德霉素(geldanamycin,GA)是最早發(fā)現(xiàn)的

3、HSP90特異性功能抑制劑,GA和其半合成衍生物17-AAG以及17-DMAG,這些小分子化合物與ATP競爭結(jié)合HSP90氮端的結(jié)合位點(diǎn)從而改變HSP90的構(gòu)象,使其不能與客戶蛋白(client proteins)及其它小分子蛋白形成復(fù)合體,抑制其分子伴侶功能,最終導(dǎo)致客戶蛋白降解,繼而阻止腫瘤賴以生存的信號網(wǎng)絡(luò),引起腫瘤細(xì)胞周期停滯,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,從而達(dá)到抑制腫瘤生長的目的。
　　目的:探討熱休克蛋白90(HSP90)功能特

4、異性抑制劑17-DMAG對體外培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901增殖及凋亡的影響。
　　方法:體外培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901,以不同濃度的17-DMAG作用后,應(yīng)用MTT法檢測人胃癌細(xì)胞SGC-7901的增殖情況;應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)碘化丙啶(PI)染色分析細(xì)胞周期分布;應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)及Annexin V-FITC試劑盒監(jiān)測17-DMAG對人胃癌細(xì)胞SGC-7901凋亡的影響。
　　結(jié)果:以不同濃度的17-DMAG作用于人胃癌

5、細(xì)胞SGC-7901,呈明顯的生長抑制作用,隨濃度的增加其抑制作用越明顯(F=241.313,P<0.001),隨作用時間的延長其抑制作用也越明顯(F=246.856,P<0.001)。以不同濃度的17-DMAG作用24h后,人胃癌細(xì)胞SGC-7901呈現(xiàn)G2/M期阻滯,并呈濃度依賴性,對照組G2/M期細(xì)胞比例為9.2％±0.85％,2.5μmol/L實(shí)驗(yàn)組G2/M期細(xì)胞增加至14.5％±0.62％,5μmol/L實(shí)驗(yàn)組G2/M期細(xì)胞增

6、加至19.9％±1.95％,試驗(yàn)組與對照組比較(F=231.991,P<0.001)差別顯著。以3μmol/L17-DMAG作用于人胃癌細(xì)胞SGC-790124 h后,早期凋亡細(xì)胞比例增加,作用48h后晚期凋亡細(xì)胞比例增加。3μmol/L17-DMAG作用24 h后,Annexin V+/PI-早期凋亡細(xì)胞比例由4.77％±1.28％增加至15.89％±3.57％,對照組與實(shí)驗(yàn)組比較差別顯著(t=53.42,P<0.001);3μmol

7、/L17-DMAG作用48 h后Annexin V+/PI-早期凋亡細(xì)胞比例由7.38±2.62至25.24％±5.82％;Annexin V+/PI+晚期凋亡細(xì)胞比例由2.23％±0.94％增加至22.10％±6.57％。實(shí)驗(yàn)組與對照組比較差別顯著(t=45.18,P<0.001)。
　　結(jié)論:體外實(shí)驗(yàn)證明HSP90功能特異性抑制劑17-DMAG可明顯抑制胃癌細(xì)胞SGC-7901的增殖,阻滯人胃癌細(xì)胞SGC-7901細(xì)胞周期于G