MicroRNA-195調(diào)控LATS2對BEL-7402-5-Fu細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：探討miR-195調(diào)控LATS2對BEL-7402/5-FU細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制。
　　方法：MicroRNA（miRNA）芯片分析 BEL-7402和 BEL-7402/5-FU細(xì)胞 miRNA的表達(dá)差異，靶基因預(yù)測軟件分析與LATS2基因相互作用的miRNA，篩選出miR-195為目的miRNA。將miR-195質(zhì)粒載體及其陰性對照質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染至BEL-7402/5-FU細(xì)胞；熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證 miR-19

2、5調(diào)控的靶基因；倒置熒光顯微鏡和實(shí)時定量RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染效率；MTT檢測細(xì)胞增殖情況，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率；實(shí)時定量RT-PCR檢測mRNA水平，Western blot檢測蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：基因芯片檢測結(jié)果表明下調(diào)兩倍的miRNA有：miR-195，miR-18a，miR-122等，BEL-7402/5-FU比BEL-7402上調(diào)兩倍的miRNA有：miR-18和miR-224；結(jié)合芯片結(jié)果及利用生物信息學(xué)篩選出

3、 miR-195作為研究對象；倒置熒光顯微鏡和實(shí)時定量RT-PCR檢測，結(jié)果表明在miR-195轉(zhuǎn)染的BEL-7402/5-FU細(xì)胞中miR-195表達(dá)水平顯著升高，MTT檢測結(jié)果顯示miR-195轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞生長指數(shù)較miRNA陰性對照組和未轉(zhuǎn)染對照組明顯降低；流式細(xì)胞儀檢測 miR-195轉(zhuǎn)染組凋亡率較miRNA陰性對照組和未轉(zhuǎn)染組增加；實(shí)時定量 RT-PCR檢測表明，miR-195轉(zhuǎn)染組較miRNA陰性對照組和未轉(zhuǎn)染組 LATS2

4、、P53的mRNA表達(dá)水平升高，CDK2的mRNA表達(dá)水平降低；Western blot檢測，LATS2、P53蛋白表達(dá)水平升高，CDK2蛋白表達(dá)水平降低；雙熒光素酶活性檢測驗(yàn)證miR-195通過靶向作用LATS23’UTR對其表達(dá)進(jìn)行負(fù)調(diào)控。
　　結(jié)論：
　　1、miR-195能夠促進(jìn)BEL-7402/5-FU細(xì)胞凋亡。
　　2、miR-195能夠上調(diào) BEL-7402/5-FU細(xì)胞中 LATS2、P53蛋白的表達(dá)，