MicroRNA-195在食管癌中的作用及相關機制研究.pdf

1、[目的]：研究miR-195在食管鱗狀細胞癌組織與癌旁正常組織中表達情況的差異及其與年齡、性別、分化程度、腫瘤位置、腫瘤浸潤程度、淋巴結轉移、疾病分期、家族史、吸煙史、飲酒史、患者預后的關系。在食管鱗癌細胞株中探索miR-195調控的靶基因和功能機制。
　　[方法]：提取食管鱗狀細胞癌組織標本和癌旁正常組織標本中的TotleRNA，應用實時熒光定量聚合酶鏈反應(Real-time PCR)比較食管鱗狀細胞癌組織和癌旁正常組織標本中

2、miR-195表達情況的差異;分析其與臨床病理特征的相關性。應用脂質體瞬時轉染方法對相對高表達miR-195的食管癌細胞株轉染miR-195抑制劑(miR-195inhibitor);相對低表達miR-195的食管癌細胞株轉染miR-195類似物(miR-195 mimic)，并同時設陰性對照組分別轉染miR-NCinhibitor和miR-NC mimic。Real-time PCR驗證轉染48h后各轉染組miR-195表達情況，同時

3、檢測轉染48h后各轉染組中p21、cdc2和cyclin B1基因的變化;流式細胞儀檢測轉染48h后各轉染組中細胞周期的變化;Western blotting檢測轉染48h后各轉染組中P21、CDC2和Cyclin B1蛋白表達的變化。
　　[結果]
　　(1)94例食管鱗狀細胞癌組織標本中，有45例(47.9％)出現(xiàn)了不同程度的miR-195表達下調，有10例(10.6％)出現(xiàn)了miR-195的表達上調，有39例(41.5

4、％)表達在正常范圍。食管鱗狀癌組織中miR-195的表達低于癌旁正常組織的miR-195的表達（P＜0.05)。
　　(2) miR-195表達降低與食管鱗癌患者的淋巴結轉移和腫瘤分期存在相關性（P＜0.05）。
　　(3) miR-195表達降低的食管鱗狀細胞癌患者的無病生存期(DFS)較miR-195表達不降低的患者縮短(P＜0.01)。
　　(4) miR-195相對表達水平是影響食管鱗狀上皮細胞癌患者生存的獨立

5、因素（P＜0.05）。
　　(5)流式細胞儀檢測各轉染組細胞周期結果顯示:食管癌細胞Eca-109中轉染miR-195 inhibitor組的細胞周期G2/M期百分比較轉染miR-NC inhibitor組降低，但統(tǒng)計學無顯著差異(P＞0.05);食管癌細胞TE-13中轉染miR-195 mimic組的細胞周期G2/M期百分比較轉染miR-NC mimic組顯著升高，細胞周期阻滯在G2/M期（P＜0.05）。
　　(6) R

6、eal-time PCR檢測各轉染組基因表達情況結果顯示:食管癌細胞Eca-109中轉染miR-195 inhibitor組中p21基因表達較轉染miR-NC inhibitor組降低、cdc2基因表達較轉染miR-NCinhibitor組升高，但統(tǒng)計學均無顯著差異(P＞0.05)，cyclinB1基因較轉染miR-NC inhibitor組顯著升高（P＜0.05);食管癌細胞TE-13中轉染miR-195 mimic組中p21基因表達

7、較轉染miR-NC mimic組顯著升高，cdc2和cyclin B1基因表達較轉染miR-NC mimic組顯著下降(P＜0.05)。
　　(7) Western blotting檢測各轉染組中蛋白表達結果顯示:食管癌細胞Eca-109中轉染miR-195 inhibitor組中P21、CDC2和Cyclin B1蛋白表達較轉染miR-NC inhibitor組無明顯差異;食管癌細胞TE-13中轉染miR-195 mimic組中