SKP2在食管癌中的擴(kuò)增和表達(dá)變化及其作用機(jī)制研究.pdf

1、蛋白泛素化及隨后的蛋白酶體降解途徑在許多細(xì)胞生命活動中發(fā)揮重要的作用，如細(xì)胞周期的進(jìn)展、細(xì)胞的生長與分化、凋亡、基因轉(zhuǎn)錄和信號傳導(dǎo)等。SCF(SKP1，Cullin/CDC53，F(xiàn)—box蛋白)復(fù)合物是一種保守的E3泛素連接酶，參與蛋白的泛素化降解，其中的F—box蛋白與底物相互作用，負(fù)責(zé)底物的識別。S期激酶相關(guān)蛋白2(SKP2)是F—box蛋白家族的成員之一，在SCFSKP2復(fù)合物中發(fā)揮作用。本實驗室前期的比較基因組雜交(CGH)結(jié)果

2、發(fā)現(xiàn)5號染色體短臂在食管癌中的擴(kuò)增比較常見，而SKP2基因恰好位于該染色體短臂的一區(qū)三帶(5p13)，本研究旨在探討SKP2在食管癌中的擴(kuò)增狀態(tài)和表達(dá)水平及其在食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 首先采用熒光原位雜交方法檢測了SKP2在50例食管癌中的擴(kuò)增情況，發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增頻率為46％(23/50)，且其擴(kuò)增與腫瘤分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)。Real-Time PCR檢測的10對食管癌及其癌旁配對標(biāo)本中，5例腫瘤組織存在SKP2的擴(kuò)

3、增。RT-PCR和Western—blotting檢測發(fā)現(xiàn)SKP2擴(kuò)增病例的蛋白表達(dá)水平也升高，說明基因擴(kuò)增是SKP2過表達(dá)的原因之一。140例標(biāo)本的免疫組化結(jié)果表明SKP2在食管癌組織中表達(dá)升高，其過表達(dá)與腫瘤分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05)，但與預(yù)后相關(guān)無顯著性。 通過RNA干擾敲降SKP2表達(dá)對EC9706細(xì)胞周期和生長無明顯影響，但可抑制細(xì)胞的運動和侵襲能力，增加EC9706細(xì)胞的失巢凋亡，降低其軟瓊脂集落形成能

4、力，并且可抑制裸鼠皮下腫瘤的生長和肺轉(zhuǎn)移。針對SKP2影響EC9706細(xì)胞抗失巢凋亡能力這一現(xiàn)象，進(jìn)一步探討了其分子機(jī)制。敲降SKP2表達(dá)后檢測了P13K—Akt、MAPK和EGFR信號通路關(guān)鍵蛋白的變化，發(fā)現(xiàn)只影響Akt的活化，對Erk和EGFR激活無影響。同時，加入PI3K抑制劑后，對照組細(xì)胞的失巢凋亡也增加。 以上結(jié)果表明SKP2在食管癌中存在擴(kuò)增和過表達(dá)，可影響食管癌細(xì)胞的運動和侵襲能力，并且可通過PI3K—Akt信號通