TFPI-2和SNCG在食管癌中的表達(dá)及其與食管癌浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系.pdf

1、背景與目的
　　 食管癌是消化系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,在我國(guó)食管癌的死亡率居惡性腫瘤的第四位,而浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的主要因?yàn)?。食管癌的浸?rùn)和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多基因參與通過(guò)多步驟和多階段完成的復(fù)雜過(guò)程。目前認(rèn)為惡性腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移與細(xì)胞外基質(zhì)的水解密切相關(guān),基質(zhì)中蛋白酶與蛋白酶抑制劑之間的平衡狀態(tài)直接影響腫瘤的生物學(xué)特性,基質(zhì)中蛋白酶的增加或蛋白酶抑制劑的減少,將導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜的水解和破壞,促進(jìn)食管癌的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。

2、　　 組織因子途徑抑制物(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)-2又稱(chēng)胎盤(pán)蛋白(placental protein,PP)-5,與TFPI是同系物,是Kunitz型絲氨酸蛋白酶抑制物家族的成員,可抑制包括基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)、胰蛋白酶、纖溶酶在內(nèi)的多種酶類(lèi),而MMPs參與了細(xì)胞外基質(zhì)的重塑,在纖維蛋白溶解、動(dòng)脈粥樣硬化、傷口愈合及腫瘤細(xì)胞的浸

3、潤(rùn)轉(zhuǎn)移和血管新生等生理病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。越來(lái)越多的研究表明TFPI-2能明顯抑制腫瘤中MMPs的活性與功能,通過(guò)維持細(xì)胞外基質(zhì)的完整、調(diào)控腫瘤細(xì)胞的凋亡及調(diào)節(jié)腫瘤血管生成等機(jī)制來(lái)控制惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。
　　 Y-Synuclein(SNCG)是神經(jīng)突觸核蛋白家族中的一員,在正常生理狀態(tài)下,具有明顯的組織特異性,主要分布在神經(jīng)系統(tǒng)中。γ-Synuclein最早發(fā)現(xiàn)于人乳腺癌cDNA文庫(kù),被稱(chēng)為乳腺癌特異基因(brea

4、st cancer specific gene,BCSG1),目前其作為腫瘤標(biāo)志物已經(jīng)在乳腺癌中廣泛研究,近年來(lái)在胃癌、胰腺癌和肝癌等消化系統(tǒng)腫瘤中也發(fā)現(xiàn)γ-Synuclein的表達(dá)異常增高,尤其在晚期腫瘤中更為明顯。此外,γ-Synuclein能夠增加腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力和對(duì)化療藥物的耐藥性,使得γ-Synuclein有可能成為新的腫瘤標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。
　　 本研究通過(guò)在蛋白水平檢測(cè)TFPI-2和SNCG在食管癌、癌旁組織

5、及正常食管黏膜組織中的表達(dá)情況及其與MMP-9及細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系,進(jìn)而探討TFPI-2和SNCG在食管癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中的作用,為食管癌的治療及預(yù)后判斷提供新的參考依據(jù)。
　　 材料與方法(1)標(biāo)本收集于安陽(yáng)腫瘤醫(yī)院2008年12月-2009年2月行食管癌手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的癌組織標(biāo)本82例、不典型增生組織20例和正常組織54例,經(jīng)10％的福爾馬林液固定后,常規(guī)脫水,石蠟包埋。(2)應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)82例食管癌組織及其相應(yīng)

6、20例癌旁不典型增生組織和54例正常食管組織中TFPI-2、SNCG和MMP-9的表達(dá),應(yīng)用TUNEL法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的凋亡并計(jì)算凋亡指數(shù)(apoptosis index,AI)。(3)應(yīng)用SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)行t檢驗(yàn)、x2檢驗(yàn)及pearson相關(guān)分析,組間兩兩比較采用卡方分割法,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 (1)TFPI-2的檢測(cè)結(jié)果:TFPI-2的陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)

7、胞膜,食管癌、癌旁不典型增生和正常食管組織中TFPI-2的陽(yáng)性表達(dá)率分別為30.487％、60.000％和87.037％,3組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。食管癌高分化組、無(wú)外膜浸潤(rùn)組、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和TNMⅠ-Ⅱ期組TFPI-2的陽(yáng)性表達(dá)率分別為48.000％、47.826％、47.619％、44.000％均高于中低分化組22.807％、侵及外膜組23.729％、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組12.500％和TNMⅢ-Ⅳ期組9.375％,且差異

8、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而與患者的年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤部位及大體分型無(wú)關(guān)(P＞0.05)。
　　 (2)SNCG的檢測(cè)結(jié)果:SNCG的陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞核,食管癌、癌旁不典型增生和正常食管組織中SNCG的陽(yáng)性表達(dá)率分別為63.414％、30.000％和3.703％,3組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。食管癌高分化組、無(wú)外膜浸潤(rùn)組、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和TNMⅠ-Ⅱ組SNCG的陽(yáng)性表達(dá)率分別為44.000％

9、、30.435％、47.619％、48.000％均低于中低分化組71.930％、侵及外膜組76.271％、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組80.000％和TNMⅢ-Ⅳ期組87.500％,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而與患者的年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤部位及大體分型無(wú)關(guān)(P＞0.05)。
　　 (3)MMP-9的檢測(cè)結(jié)果:MMP-9的陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì),食管癌、癌旁不典型增生和正常食管組織中MMP-9的表達(dá)陽(yáng)性率分別為71.951％、40

10、.000％和11.111％,3組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。食管癌高分化組、無(wú)外膜浸潤(rùn)組、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和TNMⅠ-Ⅱ期組MMP-9的陽(yáng)性表達(dá)率分別為56.000％、43.478％、54.762％、60.000％均低于中低分化組78.947％、侵及外膜組83.051％、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組90.000％和TNMⅢ-Ⅳ期組90.625％,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而與患者的年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤部位及大體分型無(wú)關(guān)(P＞0.

11、05)。
　　 (4)食管癌組織中TFPI-2與MMP-9的關(guān)系:82例食管癌組織中TFPI-2與MMP-9的共陽(yáng)性表達(dá)占4例,共陰性表達(dá)占2例,經(jīng)Pearson相關(guān)分析TFPI-2與MMP-9的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=0.636,P=0.000)(P<0.05)
　　 (5)食管癌組織中SNCG與MMP-9的關(guān)系:82例食管癌組織中SNCG與MMP-9的共陽(yáng)性表達(dá)占45例,共陰性表達(dá)占16例,經(jīng)Pearson相關(guān)分析SNCG

12、與MMP-9的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.393,P=0.000)(P<0.05)
　　 (6)食管癌組織申TFPI-2與SNCG之間的關(guān)系:82例食管癌組織中TFPI-2與SNCG的共陽(yáng)性表達(dá)占12例,共陰性表達(dá)占17例,經(jīng)Pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),TFPI-2與SNCG的表達(dá)無(wú)相關(guān)關(guān)系(r=0.207,P=0.055)(P>0.05)
　　 (7)TFPI-2、SNCG與細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系:TFPI-2陽(yáng)性表達(dá)的食管癌組

13、織其細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)(8.125±2.139)高于陰性表達(dá)者(4.861±2.584),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；SNCG陽(yáng)性表達(dá)的食管癌組織其細(xì)胞凋亡指數(shù)(4.423±2.689)低于陰性表達(dá)者(7.100±2.918),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 (1)TFPI-2在食管癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于在正常食管黏膜組織和癌旁組織中的表達(dá),TFPI-2的低表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度

14、、TNM分期和分化程度密切相關(guān),但與患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤部位、腫瘤大體分型無(wú)關(guān),TFPI-2為抑癌基因,其低表達(dá)可能參與了食管癌的發(fā)生、發(fā)展。
　　 (2)SNCG在食管癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于在正常食管黏膜組織和癌旁組織中的表達(dá),SNCG的高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、TNM分期和分化程度密切相關(guān),但與患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤部位、腫瘤大體分型無(wú)關(guān),SNCG為癌基因,其高表達(dá)可能參與了食管癌的發(fā)生、發(fā)展。<

15、br>　　 (3)MMP-9在食管癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于在正常食管黏膜組織和癌旁組織中的表達(dá),MMP-9的高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、TNM分期和分化程度密切相關(guān),但與患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤部位、腫瘤大體分型無(wú)關(guān),其高表達(dá)參與了食管癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移。
　　 (4)TFPI-2與MMP-9的表達(dá)呈負(fù)相關(guān),提示TFPI-2通過(guò)抑制MMP-9,降低對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的破壞,保持基質(zhì)和基底膜的完整,抑制食管癌的浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移。