EphrinA2和EphA7在食管癌中的表達(dá)和意義.pdf

1、我國(guó)是食管癌高發(fā)國(guó)家，占全球病例數(shù)的一半。太行山區(qū)是我國(guó)的高發(fā)地區(qū)，包括河南林縣、河北磁縣、山西陽(yáng)城等。環(huán)境和遺傳因素共同作用食管癌的演變。食管癌地區(qū)分布差異和高發(fā)區(qū)家族聚集現(xiàn)象提示遺傳因素起重要作用。
　　 Eph家族是目前已知最大的酪氨酸激酶受體，廣泛參與生物學(xué)事件的起始和調(diào)控。Eph和Ephrin在多種腫瘤高表達(dá)并促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。EphrinA2是EphA家族的重要配體，在乳腺癌和肝癌的研究被報(bào)道。EphA7是EphrinA

2、2的受體，在肝癌、腸癌、胃癌的研究被報(bào)道。
　　 目的：
　　 研究EphrinA2和EphA7在食管癌組織mRNA和蛋白表達(dá)水平及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，進(jìn)一步研究EphrinA2對(duì)食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)影響。
　　 材料與方法：
　　 1．研究對(duì)象的選取，組織標(biāo)本的采集及臨床資料的收集
　　 選取92例在林州市腫瘤醫(yī)院接受手術(shù)且無(wú)放化療史的食管癌患者。采集標(biāo)本前向患者及家屬說(shuō)明研究意義并獲得患者同意。

3、根據(jù)病歷收集患者臨床資料。
　　 2．組織樣本中EphrinA2和EphA7 mRNA表達(dá)水平的測(cè)定
　　 采用real-time PCR技術(shù)，以β-actin為內(nèi)參基因，檢測(cè)EphrinA2和EphA7 mRNA水平。
　　 3．檢測(cè)EphrinA2和EphA7在組織樣本的蛋白水平
　　 通過(guò)Western blot和免疫組化法檢測(cè)EphrinA2和EphA7蛋白水平。在200倍顯微鏡下觀察免疫組化切片

4、染色最強(qiáng)的3個(gè)視野，以胞漿棕黃色為陽(yáng)性，癌組織與正常組織陽(yáng)性細(xì)胞百分比的比值作為判斷食管癌蛋白表達(dá)水平指標(biāo)。
　　 4．檢測(cè)EphrinA2在食管癌細(xì)胞系的表達(dá)和影響
　　 采用Western blot技術(shù)檢測(cè)EphrinA2在8種人類食管鱗癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況。檢測(cè)EphrinA2對(duì)KYSE-180細(xì)胞系的影響，繪制生長(zhǎng)曲線。
　　 5．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 采用SPSS12.0軟件，通過(guò)t檢驗(yàn)比較Ephr

5、inA2和EphA7 mRNA水平，通過(guò)x2檢驗(yàn)比較EphrinA2和EphA7 mRNA和蛋白水平與臨床病理參數(shù)關(guān)系。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05
　　 結(jié)果：
　　 1食管癌組織的熒光定量PCR結(jié)果
　　 1.1食管癌組織中EphrinA2和EphA7 mRNA水平
　　 EphrinA2和EphA7 mRNA水平分別在59.8％(55/92)和73.9％(68/92)的癌組織上調(diào)。癌組織EphrinA2和E

6、phA7mRNA水平均顯著高于正常組織(t=5.695，P＜0.05；t=7.179，P＜0.05)。兩基因mRNA水平顯著正相關(guān)（r=0.283，P＜0.05）。
　　 1.2食管癌組織中EphrinA2和EphA7mRNA水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系
　　 EphrinA2mRNA在不同病理類型差異顯著(x2=6.463，P＜0.05)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著高于未轉(zhuǎn)移組(x2=6.800，P＜0.05)，在腫瘤家族史組顯著

7、高于無(wú)腫瘤家族史組(x2=6.049，P＜0.05)。EphA7 mRNA在60歲以上組顯著高于60歲以下組(x2=6.506，P＜0.05)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著高于未轉(zhuǎn)移組(x2=11.272，P＜0.05)。
　　 2．食管癌組織的免疫組化和Western blot結(jié)果
　　 2.1食管癌組織中EphrinA2和EphA7蛋白水平
　　 免疫組化和Western Blot結(jié)果顯示癌組織EphrinA2和Eph

8、A7蛋白水平高于正常組織。
　　 2.2 EphrinA2和EphA7蛋白水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系
　　 EphrinA2蛋白水平在腫瘤家族史組顯著高于無(wú)腫瘤家族史組(x2=4.304，P＜0.05)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著高于未轉(zhuǎn)移組(x2=4.608，P＜0.05)。EphA7蛋白水平在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著高于未轉(zhuǎn)移組(x2=4.800，P＜0.05)。
　　 3．檢測(cè)EphrinA2在人類食管鱗癌細(xì)胞系的表達(dá)情況和

9、對(duì)細(xì)胞系的生長(zhǎng)影響
　　 Western blot結(jié)果顯示EphrinA2在KYSE-180細(xì)胞表達(dá)最低。MTT比色法顯示KYSE-180細(xì)胞系的吸光度每天都有EphrinA2H＞EphrinA2L＞空載細(xì)胞。
　　 結(jié)論：
　　 1．EphrinA2和EphA7 mRNA和蛋白在食管癌組織較正常組織表達(dá)上調(diào)。EphrinA2和EphA7 mRNA水平正相關(guān)，可能在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起協(xié)同作用。
　　 2.