EphAl-ephrinA3在食管癌組織中的表達(dá)及其與臨床參數(shù)的關(guān)系.pdf

1、在世界范圍內(nèi)，食管癌高發(fā)區(qū)包括：中國(guó)、南美、西歐、南非、日本和前蘇聯(lián)地區(qū)。90年代以來(lái)，某些危險(xiǎn)因素得到有效的干預(yù)改善后，河南省食管癌發(fā)病率和死亡率逐漸呈緩慢下降趨勢(shì)，但還是明顯高于全國(guó)平均水平。Eph基因由于在分泌紅細(xì)胞生成素的人類肝細(xì)胞癌細(xì)胞株中高表達(dá)而被命名，是受體酪氨酸激酶基因家族中最大的一個(gè)亞群，參與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、胚胎發(fā)育及細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)遞等過(guò)程，有相當(dāng)重要的生理功能。EphA1基因是受體酪氨酸激酶Eph家族中的第一個(gè)成員，位

2、于染色體7q34。ephrinA3是EphA1的主要配體之一，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在人類癌癥的EphA1表達(dá)水平是可變的，但是EphA1和ephrinA3在食管癌中的研究卻很少。
　　 目的：
　　 分析EphA1和ephrinA3mRNA的表達(dá)水平與患者的病理參數(shù)之間的關(guān)系，研究這兩個(gè)分子表達(dá)的臨床意義。在食管癌組織標(biāo)本中對(duì)EphA1和ephrinA3的表達(dá)進(jìn)行了蛋白水平上的檢測(cè)，并利用食管癌細(xì)胞系，初步考察了ephrinA3在

3、食管癌細(xì)胞生物學(xué)方面的功能，從不同層次和角度對(duì)ephrinA3及EphA1在食管癌中的作用，功能及臨床意義進(jìn)行了研究和探討。
　　 材料與方法：
　　 1對(duì)象選擇、組織樣本的采集與患者臨床資料的收集
　　 選取2007-2008年在林州市腫瘤醫(yī)院就醫(yī)的食管癌患者為研究對(duì)象，采集術(shù)后患者食管癌原發(fā)灶及其匹配的正常食管組織有效標(biāo)本92對(duì)。收集病人的臨床資料，便于統(tǒng)計(jì)分析和研究。
　　 2樣本中EphA1/ep

4、hrinA3 mRNA水平的測(cè)定
　　 采用real-time PCR測(cè)定食管癌患者癌組織及匹配正常組織中EphA1/ephrinA3基因mRNA的表達(dá)水平。
　　 3樣本中EphA1和ephrinA3蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)及ephrinA3對(duì)食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)影響的測(cè)定
　　 通過(guò)Western blot和免疫組織化學(xué)染色法測(cè)定食管癌患者癌組織以及其匹配的癌旁正常組織中EphA1和ephrinA3的蛋白表達(dá)水平。在8株

5、人類食管癌細(xì)胞系中檢測(cè)ephrinA3的蛋白表達(dá)水平，最后選定ephrinA3本底表達(dá)水平最低的TE-12細(xì)胞系，構(gòu)建ephrinA3的穩(wěn)定表達(dá)株。然后，通過(guò)并用MTT比色法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，檢測(cè)ephrinA3對(duì)食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。
　　 4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。對(duì)△(△Ct)進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)及相關(guān)分析。對(duì)食管癌樣本EphA1和ephrinA3基因mRNA表達(dá)水平單個(gè)臨床參數(shù)間

6、的關(guān)系采用x2檢驗(yàn)，以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1熒光定量PCR結(jié)果
　　 1.1 EphA1和ephrinA3基因在食管癌組織中mRNA表達(dá)水平
　　 在92對(duì)臨床樣品中，與配對(duì)的正常食管組織相比，有82例(89.13％)食管癌組織中的EphA1表達(dá)上調(diào)，在食管癌組織中EphA1基因的mRNA的表達(dá)與正常食管組織相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=-6.899，P＜0.01)。
　　 有

7、53(57.61％)例食管癌組織中的ephrinA3表達(dá)上調(diào)，在食管癌組織中ephrinA3基因的mRNA的表達(dá)與正常食管組織相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=-2.436，P＜0.05)。
　　 1.2 EphA1和ephrinA3基因在食管癌組織中的mRNA表達(dá)與臨床參數(shù)之間多因素分析
　　 腫瘤家族史組的食管癌組織中EphA1 mRNA的表達(dá)水平顯著低于無(wú)腫瘤家族史組(x2=5.838，P＜0.05)，不同病理類型間，EphA

8、1 mRNA表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=9.660,P＜0.01)。
　　 腫瘤家族史組的食管癌組織中ephrinA3 mRNA的表達(dá)水平顯著低于無(wú)腫瘤家族史組(x2=5.417，P＜0.05)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組食管癌組織中ephrinA3 mRNA的表達(dá)水平顯著低于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組(x2=20.504，P＜0.01)，不同病理類型間，ephrinA3mRNA表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=6.434，P＜0.05)。
　

9、　 2 Western Blot和免疫組化結(jié)果及EphA1和ephrinA3基因在食管癌組織中的蛋白表達(dá)與臨床參數(shù)之間多因素分析
　　 腫瘤家族史組的食管癌組織中EphA1蛋白的表達(dá)水平顯著低于無(wú)腫瘤家族史組(x2=11.482，P＜0.01);不同病理類型間，EphA1蛋白表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=12.818，P＜0.01）。
　　 腫瘤家族史組的食管癌組織中ephrinA3蛋白的表達(dá)水平顯著低于無(wú)腫瘤家族史

10、組(x2=10.391，P＜0.01)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組食管癌組織中ephrinA3蛋白的表達(dá)水平顯著低于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組（x2=13.615，P＜0.01）不同病理類型間，ephrinA3蛋白表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=7.525，P＜0.05)。
　　 3人類食管癌細(xì)胞系中ephrinA3的表達(dá)情況
　　 采用Western blot方法，檢測(cè)了8株人食管癌細(xì)胞中ephrinA3的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示：TE-12，

11、Ec-9706，KYSE-180中表達(dá)水平較低。選用本底表達(dá)水平最低的TE-12細(xì)胞系構(gòu)建ephrinA3的穩(wěn)定表達(dá)株，以進(jìn)一步考察ephrinA3對(duì)食管癌細(xì)胞的影響。
　　 結(jié)論：
　　 1 ephrinA3和EphA1 mRNA和蛋白在食管癌組織較配對(duì)的正常食管組織表達(dá)下調(diào)。ephrinA3和EphA1 mRNA表達(dá)水平負(fù)相關(guān)，二者可能在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起協(xié)同作用。
　　 2 ephrinA3 mRNA和蛋白