MTA2在食管癌組織中的表達調控及其功能機制的研究.pdf

1、目的：研究轉移相關基因2（MTA2）在食管癌組織中的表達及調控，和對食管癌細胞體內外增殖、遷移和侵襲能力的影響，并探討 MTA2促進食管癌細胞發(fā)生EMT轉變的可能機制。
　　方法：
　　1應用實時熒光定量PCR法檢測正常食管上皮組織、癌旁組織和癌組織中MTA2、Sp1、miR146A、miR149、miR34A的表達，并分析MTA2與Sp1、miR146A、miR149、miR34A表達水平的相關性，同時分析MTA2的表達水

2、平與食管癌患者臨床病理參數的相關性。
　　2應用western blot和免疫組織化學法檢測正常食管上皮組織和食管癌組織中MTA2蛋白的表達。
　　3應用MTS法，Transwell遷移和侵襲實驗檢測過表達或敲低MTA2對食管癌細胞增殖活性、遷移和侵襲能力的影響。
　　4應用實時熒光定量PCR法檢測過表達或敲低MTA2后對EMT相關基因表達水平的影響。
　　5應用western blot法檢測過表達或敲低MTA2

3、后對EMT相關蛋白表達水平的影響。
　　6應用細胞免疫熒光法檢測敲低MTA2后對EMT相關蛋白表達水平的影響。
　　7應用免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）實驗檢測MTA2能否與Twist相結合。
　　8應用實時熒光定量PCR法和western blot檢測正常食管上皮組織及癌組織中eIF4E的基因和蛋白表達水平。
　　9應用Transwell遷移和侵襲實驗及western blot實驗檢

4、測敲低MTA2同時過表達eIF4E對食管癌細胞遷移和侵襲能力的影響以及EMT相關蛋白表達水平的變化。
　　10應用免疫組織化學法檢測裸鼠移植瘤中 Ki-67和 CD31的表達情況。
　　11應用western blot檢測裸鼠移植瘤中EMT相關蛋白的表達情況。
　　結果：
　　1實時熒光定量PCR結果顯示，與正常食管上皮組織和癌旁組織相比，食管癌組織中MTA2的表達上調（P<0.05），且食管癌組織中MTA2與S

5、p1的表達水平呈正相關關系（r=0.407，P<0.05)，而食管癌組織中 MTA2與 miR146A、miR149、miR34A的表達水平均無相關性（P>0.05）。食管癌組織中MTA2的表達水平與患者的年齡、性別、分化程度和腫瘤大小無關（P>0.05)，而與腫瘤的TNM分期和淋巴結浸潤有關（P<0.05）。
　　2 Western blot與免疫組織化學結果均顯示，與正常食管上皮組織相比，食管癌組織中MTA2蛋白的表達水平有升

6、高的趨勢。
　　3 MTS法檢測結果顯示，敲低 MTA2能夠抑制食管癌 KYSE30與KYSE510細胞的增殖活性（P<0.05），而過表達MTA2對食管癌KYSE30與KYSE510細胞的增殖活性具有促進作用（P<0.05）。
　　4 Transwell實驗結果顯示，敲低MTA2能夠抑制食管癌KYSE30與KYSE510細胞的遷移和侵襲能力（P<0.05），過表達MTA2能夠促進食管癌KYSE30與KYSE510細胞的遷移

7、和侵襲能力（P<0.05）。
　　5實時熒光定量PCR實驗和western blot實驗結果顯示，敲低MTA2能夠促進 E-cadherin基因和蛋白的表達（P<0.05），降低 N-cadherin、Vimentin、CD24、MYLK基因和蛋白的表達（P<0.05）；過表達 MTA2能夠降低 E-cadherin基因和蛋白的表達（P<0.05），促進 N-cadherin、Vimentin、CD24、MYLK基因和蛋白的表達（

8、P<0.05）。
　　6細胞免疫熒光實驗結果顯示，敲低MTA2能夠促進E-cadherin的表達，降低N-cadherin和Vimentin的表達。
　　7免疫共沉淀實驗結果顯示，MTA2在食管癌細胞中能夠與Twist蛋白相結合。
　　8實時熒光定量PCR實驗結果顯示，與正常食管上皮組織相比，食管癌組織中eIF4E的表達水平明顯增高（P<0.05），且食管癌組織中eIF4E與 MTA2的表達水平呈正相關關系（r=0.4

9、18，P=0.001）。Western blot實驗結果顯示，與正常食管上皮組織相比，食管癌組織中eIF4E的蛋白表達水平也呈現上升趨勢。
　　9敲低MTA2能夠明顯降低eIF4E和p-eIF4E的表達（P<0.05）。與單獨轉染si-MTA2組相比，過表達eIF4E能夠逆轉敲低MTA2對食管癌細胞遷移和侵襲能力的影響（P<0.05），并降低食管癌細胞中E-cadherin的表達水平（P<0.05），使N-cadherin、Vim

10、entin的表達水平升高（P<0.05）。
　　10免疫組織化學法檢測到MTA2過表達組的裸鼠移植瘤中Ki-67和CD31的表達水平均高于空載體組。
　　11 Western blot實驗結果顯示，MTA2過表達組裸鼠移植瘤與空載體組移植瘤相比，N-cadherin、Vimentin的表達有升高的趨勢，而E-cadherin的表達水平有降低的趨勢。
　　結論：
　　食管癌中 MTA2的表達水平上調，可能與轉錄因子