核黃素轉運蛋白RFT2在食管癌中的表達調控及功能研究.pdf

1、核黃素轉運蛋白2(Riboflavin transporter 2,RFT2),屬于人核黃素轉運蛋白家族,在小腸中高表達,主要功能是轉運核黃素。以往大量的研究證明：
　　1)食管癌高發(fā)區(qū)人群普遍缺乏核黃素;
　　2)核黃素缺乏是促進食管癌發(fā)生的重要環(huán)境危險因素;
　　3)通過食鹽添加或給予藥片,補充核黃素等微量營養(yǎng)素,與安慰劑組相比,能夠顯著降低食管癌高發(fā)區(qū)人群,但存在著明顯的個體差異。
　　這暗示著可能是核黃素

2、轉運蛋白,在食管癌高發(fā)區(qū)部分人群中發(fā)生了某些異常。近年,在食管癌中進行的一項全基因組關聯(lián)分析研究發(fā)現(xiàn),位于RFT2基因上游5622nt的一個SNP位點rs13042395是食管癌易感位點。目前,有關rs13042395位點是否能夠調控RFT2基因表達,RFT2在食管癌中的表達模式及其功能等,均是未知的重要科學問題。在本論文中,我們對這些科學問題進行研究,實驗結果概述如下。
　　首先,對食管癌組織標本基因組DNA的rs1304239

3、5位點進行測序,鑒定不同基因型的分布比例,同時分析與臨床病理資料及患者生存期的相關性。實驗結果表明,與擁有CT基因型的患者相比,rs13042395位點CC基因型患者的生存期明顯縮短,P=0.048。
　　其次,報告基因實驗結果顯示,rs13042395位點,與T型等位基因相比,C型等位基因等位基因可以明顯上調報告基因的表達;而報告基因、siRNA干擾、基因過表達以及EMSA等實驗結果一致提示,rs13042395位點不同基因型調

4、控下游基因表達的能力是由于結合了不同的轉錄因子所致。
　　再次,免疫組化實驗結果表明,與正常食管上皮組織細胞相比,RFT2蛋白在食管癌組織細胞中的表達定位發(fā)生了顯著變化,在細胞膜上的表達明顯減少,主要出現(xiàn)在胞漿及胞核;而胞核高表達的食管癌患者的生存率顯著低,P=0.017。
　　另外,在從食管癌細胞系克隆RFT2基因時,發(fā)現(xiàn)了一種新的剪切亞型,而免疫印跡實驗發(fā)現(xiàn)該亞型編碼了一較小的蛋白肽鏈,但具體定位在食管癌細胞的胞漿,還是