食管癌中EphB1和EphrinB1表達(dá)及意義.pdf

1、食管癌是一種惡性程度極高的消化道腫瘤,位于全球腫瘤發(fā)病的第八位,腫瘤死亡的第六位。在世界范圍內(nèi),食管癌高發(fā)區(qū)包括:中國、南非、東非等。據(jù)最新報(bào)道,食管癌標(biāo)化死亡率最高的地區(qū)仍然是河南省(32.95/10萬人)。對食管癌相關(guān)基因的深入研究,對于食管癌的早期診斷和開發(fā)有效的基因治療靶點(diǎn)及策略非常重要。
　　 Eph/Ephrin家族是目前已知最大的RTKs家族之一。Eph與ephrin介導(dǎo)的雙向信號傳導(dǎo)參與調(diào)節(jié)機(jī)體的許多正常生理機(jī)能

2、,內(nèi)穩(wěn)態(tài)及疾病和腫瘤的發(fā)生發(fā)展。目前,關(guān)于Eph/Ephrin家族在食管癌中的表達(dá)及作用報(bào)道甚少,因而,檢測分析了EphB1和EphrinB1在食管癌原發(fā)灶及其匹配的正常食管組織中表達(dá)水平及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系和意義,進(jìn)一步研究EphrinB1對食管癌細(xì)胞生長的影響。
　　 材料與方法:
　　 1、對象選擇、組織樣本的采集與患者臨床資料的收集
　　 選取2007年至2008年在河南省林州市腫瘤醫(yī)院就醫(yī)的食管癌患

3、者作為研究對象。采集92例手術(shù)后患者食管癌原發(fā)灶及其匹配的正常食管組織樣本,均經(jīng)病理學(xué)鑒定。收集病人基本資料和相關(guān)臨床病理資料,便于統(tǒng)計(jì)分析和研究。
　　 2、樣本中EphB1和EphrinB1 mRNA水平的測定
　　 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)測定食管癌組織中EphB1和EphrinB1 mRNA表達(dá)水平,以β-actin作為內(nèi)參基因。通過測定樣本中目的基因模板的Ct值即循環(huán)閾值來反映模板的含量。
　　 3、

4、樣本中EphB1和EphrinB1蛋白水平的測定
　　 通過western blot和免疫組織化學(xué)染色法測定食管癌癌組織中EphB1和EphrinB1蛋白表達(dá)水平。每一標(biāo)本在200倍顯微鏡下觀察3個(gè)染色最強(qiáng)的視野,記數(shù)陽性細(xì)胞數(shù),并計(jì)算陽性細(xì)胞百分比,每個(gè)患者的食管癌組織中陽性細(xì)胞百分比與正常食管組織中陽性細(xì)胞百分比的比值作為食管癌蛋白表達(dá)水平指標(biāo)。
　　 4、細(xì)胞轉(zhuǎn)染
　　 將EphrinB1的表達(dá)載體和pcD

5、NA3.1空載體分別轉(zhuǎn)入TE-12細(xì)胞。經(jīng)克隆后,通過western blot檢測EphrinB1的表達(dá)水平,并采用MTT比色法分析EphrinB1對TE-12細(xì)胞生長的影響。
　　 5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 運(yùn)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件,采用配對t檢驗(yàn)比較mRNA表達(dá)水平。采用x2檢驗(yàn)比較EphB1和EphrinB1 mRNA及蛋白表達(dá)水平與其臨床病理參數(shù)的關(guān)系。以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　

6、　 1、食管癌中EphB1和EphrinB1 mRNA表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系
　　 1.1 EphB1和EphrinB1在食管癌中mRNA的表達(dá)
　　 熒光定量PCR結(jié)果顯示,與匹配的正常食管組織相比,EphB1和EphrinB1分別在66.3％(61/92例)和64.2％(59/92例)食管癌組織表達(dá)上調(diào)。配對t檢驗(yàn)顯示:食管癌組織與匹配正常食管組織中EphB1和EphrinB1 mRNA的表達(dá)水平均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差

7、異。Pearson's相關(guān)分析表明,在食管癌組織中,EphB1和EphrinB1 mRNA表達(dá)呈高度正相關(guān)。
　　 1.2食管癌中EphB1和EphrinB1 mRNA表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系
　　 與無腫瘤家族史組相比,EphB1 mRNA水平在有腫瘤家族史組中高表達(dá)。EphB1在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中的表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。在吸煙患者癌組織中,EphrinB1 mRNA表達(dá)水平高于非吸煙患者。與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者相比,E

8、phrinB1 mRNA在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中高表達(dá)。EphrinB1 mRNA的表達(dá)與浸潤深度之間有顯著的相關(guān)性。
　　 2、食管癌中EphB1和EphrinB1蛋白表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系
　　 2.1 Western blot分析與正常組織相比,EphB1和EphrinB1蛋白表達(dá)水平在腫瘤組織中呈現(xiàn)明顯的上調(diào)趨勢。
　　 2.2 EphB1和EphrinB1在食管癌中的蛋白表達(dá)EphB1和EphrinB1

9、蛋白表達(dá)水平分別在63.0％(58/92例)和60.9％(56/92例)食管癌組織中表達(dá)陽性,與real time PCR結(jié)果一致。
　　 2.3食管癌中EphB1和EphrinB1蛋白表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系EphB1蛋白在有腫瘤家族史組中的表達(dá)水平高于無腫瘤家族史組。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組食管癌組織中EphB1蛋白表達(dá)高于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組。EphB1蛋白的表達(dá)與浸潤深度之間也具有顯著的相關(guān)性。
　　 吸煙人群EphrinB1

10、蛋白表達(dá)水平高于不吸煙人群。有腫瘤家族史組EphrinB1蛋白表達(dá)水平高于無腫瘤家族史組。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組EphrinB1蛋白表達(dá)水平高于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組。浸潤越深,EphrinB1蛋白的表達(dá)水平越高。
　　 3、細(xì)胞轉(zhuǎn)染結(jié)果人食管癌細(xì)胞系在轉(zhuǎn)染EphrinB1后其增殖能力增強(qiáng),且隨著EphrinB1表達(dá)水平的升高,其癌細(xì)胞增殖能力也越來越強(qiáng)。
　　 結(jié)論：
　　 1、與正常食管組織相比,食管癌組織中EphB1高表達(dá)。

11、EphB1 mRNA及蛋白表達(dá)與腫瘤家族史、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。
　　 2、與正常食管組織相比,食管癌組織中EphrinB1高表達(dá)。EphrinB1 mRNA和蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度密切相關(guān)。
　　 3、食管癌中EphB1和EphrinB1的表達(dá)水平呈正相關(guān),二者可能在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中產(chǎn)生協(xié)同作用,共同調(diào)節(jié)腫瘤血管生成、腫瘤細(xì)胞增殖,侵襲及轉(zhuǎn)移。
　　 4、EphrinB1的過表達(dá)增強(qiáng)了人食管癌細(xì)胞的