抑癌基因fez、lrig1在食管癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景與目的 食管癌(esophageal carcinoma)是人類常見的惡性腫瘤之一。全世界每年約30萬死于食管癌，其中50﹪在我國，每年因食管癌死亡的人數(shù)約占我國全部惡性腫瘤死亡總數(shù)的1/4，嚴(yán)重危害人類健康。食管癌按病理學(xué)類型主要分為鱗狀細(xì)胞癌和腺癌。在中國主要以鱗狀細(xì)胞癌為主。食管癌的病因尚不十分清楚，一般認(rèn)為與強(qiáng)致癌物的存在、食管損傷、食管疾病以及食物的刺激作用、營養(yǎng)不良和微量元素缺乏及遺傳因素等多方面因素有關(guān)。與其他

2、惡性腫瘤的生物學(xué)特性一樣，食管癌同樣具有侵襲與轉(zhuǎn)移的特征。而且，由于食管癌的早期臨床癥狀不明顯，發(fā)現(xiàn)時已屬中晚期，使得早期診斷率很低，治愈率大大降低，預(yù)后差。因此，對食管癌的早期診斷及侵襲與轉(zhuǎn)移機(jī)制發(fā)面的研究非常重要，其意義在于可以通過提前發(fā)現(xiàn)并阻止腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移，配合手術(shù)、放療、化療等手段對腫瘤進(jìn)行綜合治療，從而提高食管癌的治愈率，改善患者的預(yù)后。 隨著細(xì)胞分子腫瘤學(xué)的發(fā)展，現(xiàn)已證實(shí)：食管癌的發(fā)生發(fā)展是多因素共同作用于食管

3、癌相關(guān)基因及調(diào)控因子，引起相關(guān)基因結(jié)構(gòu)及表達(dá)水平改變，最終導(dǎo)致食管癌的發(fā)生。目前普遍認(rèn)為，癌基因的激活和抑癌基因的失活是細(xì)胞癌變的分子基礎(chǔ)。癌基因的激活和抑癌基因的失活的相互作用，尤其是抑癌基因的失活越來越引起人們的重視。癌基因由原癌基因激活而來，存在于正常細(xì)胞的癌基因稱為原癌基因，是細(xì)胞基因組的正常成分，只有經(jīng)某些因素作用后，原癌基因的結(jié)構(gòu)改變和激活成為癌基因，才具有致癌活性；抑癌基因從概念上來說，凡是產(chǎn)生直接或間接抑制細(xì)胞增殖、癌變

4、的腫瘤抑制基因，都可稱為抑癌基因。通常認(rèn)為癌基因和抑癌基因是一對矛盾的統(tǒng)一體，互相制約，形成一種平衡，控制著細(xì)胞的生長和分化，細(xì)胞分化異常導(dǎo)致上皮細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化是食管鱗癌發(fā)生的重要機(jī)制之一。由于機(jī)體經(jīng)常受到外界環(huán)境中有害因素的侵害，為防止細(xì)胞的癌變發(fā)生，需要抑癌基因處于一定程度的表達(dá)，通常是低水平表達(dá)。當(dāng)物理化學(xué)因素導(dǎo)致DNA損傷，而修復(fù)基因修復(fù)失敗，導(dǎo)致基因突變，或者病毒致癌因素整合到DNA中，導(dǎo)致基因突變，從而導(dǎo)致原癌基因激活，或

5、抑癌基因失活，產(chǎn)生突變細(xì)胞；若免疫監(jiān)視失敗，形成單克隆或多克隆增殖，進(jìn)而浸潤或轉(zhuǎn)移，最終形成腫瘤。抑癌基因是通過純合缺失或失活而引起惡性轉(zhuǎn)化的基因，其在控制細(xì)胞生長、增殖及分化過程中起著十分重要的負(fù)調(diào)節(jié)作用，并能潛在抑制腫瘤生長。反之，則可導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化而發(fā)生腫瘤。有實(shí)驗(yàn)表明，正常細(xì)胞與癌細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下融合后，其雜交細(xì)胞的致癌性降低或消失。其機(jī)制是正常細(xì)胞中含有癌變的基因，即抑癌基因，也稱腫瘤抑制基因。在細(xì)胞癌變過程中，不僅僅是

6、由于原癌基因的激活，而且涉及抑癌基因的失活。 當(dāng)前多方面資料表明，fez(亮氨酸拉鏈腫瘤抑制基因leuaine zipper tumorsuppressor，fez/lztsl，下簡稱fez)、lrigl(亮氨酸重復(fù)序列和免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域，1eucine rich repeats and immunoglobtIlin like domains，下簡稱lrigl)基因是抑癌基因，迄今為止，在人類多種腫瘤中均可檢測到fez、lr

7、igl基因的異常表達(dá)。我國是食管癌高發(fā)地區(qū)，對食管癌組織．fez、lrigl基因的研究，迄今為止，尚未見報(bào)道。鑒于此，我們應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)(reversetrancriptase polymerase chain reaction，RT-PCR)分析法檢測．fez mRNA、lriglmRNA在食管癌標(biāo)本各組織中(癌組織、癌組織及遠(yuǎn)癌粘膜組織)的表達(dá)情況，為食管癌的早期診斷、預(yù)后評估及基因診治探索可行的途徑。 材料和

8、方法 (1)河南省腫瘤醫(yī)院胸外科2006-03/2006-08月行手術(shù)切除的食管癌住院患者36(男26,女10)例，年齡62.17±7.2歲(40～75歲)：術(shù)前均未接受化、放療，腫瘤組織經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)均為鱗狀上皮細(xì)胞癌；標(biāo)本均在手術(shù)中收集，取材后速凍于液氮中，后于-80℃超低溫冰箱中貯存?zhèn)溆?。?biāo)本取材大小均約0.5cm×0.5cm×0.2cm；癌組織均在原發(fā)灶取材，避開壞死、炎癥區(qū)域；癌旁組織取自相應(yīng)腫塊旁2cm的食管黏膜組

9、織；遠(yuǎn)癌組織均取自距腫塊邊緣5cm以上的食管黏膜組織。 (2)提取組織中總RNA，用RT-PCR方法擴(kuò)增目的基因．fez、lrigl。同時擴(kuò)增GAPDH基因做為內(nèi)參照基因?qū)ez,lrigl做半定量分析，檢測fezmRNh、lriglmRNh分別在癌組織、癌旁組織及遠(yuǎn)癌黏膜組織中的表達(dá)情況。 (3)fez mRNA、lriglmRNA的表達(dá)水平以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，統(tǒng)計(jì)工具采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)分析軟件。根據(jù)資料類型

10、采用t檢驗(yàn)、ANOVA、X<'2>檢驗(yàn)及Fisher'sExact Test。取P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 36例食管遠(yuǎn)癌黏膜組織中均有fez mRNA、lrigl mRNA陽性表達(dá)，癌旁組織中有33例(91．7﹪)．fez mRNA陽性表達(dá)，33例(91．7﹪)lrigl mRNA陽性表達(dá)；而食管癌組織中fez mRNA、lrigl mRNA陽性表達(dá)數(shù)分別為14例(38．9﹪)和15(41．7﹪)例：表達(dá)

11、缺失分別為22例和21例。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，fezmRNA、lrigl mRNA在食管癌癌組織的陽性表達(dá)水平低于在癌旁組織和在遠(yuǎn)癌組織中的表達(dá)；且在癌旁組織中二基因mRNA的表達(dá)也低于在遠(yuǎn)癌組織中的表達(dá)；隨著分化程度的增強(qiáng)(低分化→高分化)二基因mRNA的陽性表達(dá)率逐漸增加；統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果顯示低分化、中分化組與高分化組有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而中分化、高分化組比較無顯著性差異；但二基因mRNA的表達(dá)與有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、食管癌浸潤深度、患者的年齡、性