土槿皮乙酸對肝癌BEL-7402細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響.pdf

1、目的：土槿皮乙酸(pseudodaric acid-B,PAB)是從我國的松科植物會錢松(PseudolarixKaempferi Gord)的根皮及近根皮中分離出來的二萜類化合物,為一種單體成分。土槿皮乙酸傳統(tǒng)上是作為一種抗真菌藥物,后來發(fā)現(xiàn)其具有抗生育、抗血管生成和抗腫瘤作用。研究證明PAB可以抑制胃癌、肺癌、肝癌、宮頸癌白血病等多種腫瘤細胞的增殖并誘導(dǎo)細胞凋亡,其作用機制可能與清除氧自由基,作用于細胞周期集細胞周期蛋白依賴性激酶,

2、影響p53、Bcl-2家族、Caspase激活,影響與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)的細胞信號傳導(dǎo)通路等有關(guān)。雖然近年來,多項實驗對PAB抗腫瘤的作用機制進行了一定的研究,而且土槿皮乙酸對肝癌細胞增殖和凋亡確實有影響,但尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)PAB對肝癌侵襲轉(zhuǎn)移作用的報道,本實驗將探討研究土槿皮乙酸對人肝癌BEL-7402細胞株侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。,以為進一步開發(fā)治療肝癌的新藥提供試驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.細胞培養(yǎng)：人肝癌細胞株BEL

3、-7402由中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院傳染科實驗室惠贈,在含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液、飽和濕度,飽和溫度為37℃,CO2濃度為5％的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　　 2.MTT比色法檢測細胞增殖：人肝癌細胞株BEL-7402細胞密度調(diào)整為5×104/L,接種于96孔培養(yǎng)板,每孔100μl。培養(yǎng)12小時后分別加入含不同濃度PAB的培養(yǎng)液,分別培養(yǎng)24,48,72h,應(yīng)用MTT比色法檢測各孔吸光度值(OD值),計算細胞生長抑制率。<

4、br>　　 3.Transwell檢測PAB對BEL-7402細胞侵襲能力的影響：冰上1:10稀釋過夜解凍的Matrigel膠并鋪至Transwell小室內(nèi)部的膜上。取指數(shù)生長期的細胞用于實驗,打勻的細胞懸液加入Transwell小室,同時加入0.5μmol·L-1PAB,我選擇的PAB濃度是用MTT篩選出的72h的IC50,以血清濃度差作為趨化條件,小室內(nèi)為含1％血清的培養(yǎng)基,下室為含30％血清的培養(yǎng)基。常規(guī)培養(yǎng)24小時后予甲醇固定

5、,姬姆薩染色,取膜,封片,鏡檢。細胞計數(shù),倒置顯微鏡下隨機選取5個視野(400*)計數(shù)細胞個數(shù),取均數(shù)。
　　 4.Transwell檢測PAB對BEL-7402細胞遷移能力的影響：體外轉(zhuǎn)移能力的測定時Transwell小室的濾膜不用Matrigel膠覆蓋。方法同Transwell侵襲實驗。
　　 5.統(tǒng)計學方法：采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件,計量資料以(-X)±S表示,采用t檢驗。
　　 結(jié)果：
　　

6、1.PAB對BEL-7402細胞增殖的影響不同濃度PAB(0.5,1.0,2.0,4.0)作用相同時間,隨著藥物濃度的增加,對細胞生長的抑制率增加,相同濃度PAB作用不同時間(24,48,72h),隨著時間的增加,對細胞生長的抑制率增加。表現(xiàn)出明顯的劑量依賴性和時間依賴性(P＜0.05),0.5μmol·L-1PAB作用24小時,對細胞生長無顯著影響。
　　 2.PAB對BEL-7402細胞侵襲遷移能力的影響PAB組遷移與侵襲細

7、胞數(shù)明顯低于對照組,對照組細胞輪廓清晰,活力旺盛,PAB組細胞明顯變圓,稀疏。PAB組遷移與侵襲能力較對照組下降,差別具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。提示PAB對于肝癌BEL-7402細胞的遷移能力有明顯的抑制作用。
　　 結(jié)論：土槿皮乙酸作用后肝癌細胞粘附率較對照組明顯下降(p＜0.05),呈時間和濃度依賴性,土槿皮乙酸作用后肝癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移細胞數(shù)較對照組明顯下降(p＜0.05)。研究結(jié)果表明土槿皮乙酸能抑制肝癌細胞增殖,降低