積雪草甙誘導(dǎo)人宮頸癌Hela細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的探討.pdf

1、佳木斯大學(xué)碩士學(xué)位論文積雪草甙誘導(dǎo)人宮頸癌Hela細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的探討姓名：邵星月申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：高學(xué)恒20060601中太捷要 佳本矩大學(xué)碩士研究生／鹼．2 -中文摘要目的：研究積雪草甙對(duì)體外培養(yǎng)的人宮頸癌H e l a 細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制和誘導(dǎo)凋亡的作用，并通過(guò)檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白S u r v i v i n 和C a s p a s e ．3 來(lái)分析其凋亡的分子機(jī)制。方法：應(yīng)用M T T 比色法觀察積雪草甙對(duì)人

2、宮頸癌H e l a 細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，應(yīng)用倒置顯微鏡和H E 染色法觀察藥物作用后細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)改變。T U N E L 法分析細(xì)胞凋亡情況。免疫組化S A B C 法檢測(cè)S u r v i v i n 和C a s p a s e - 3 蛋白在積雪草甙誘導(dǎo)H e l a 細(xì)胞凋亡中的作用。結(jié)果：積雪草甙可明顯抑制宮頸癌H e l a 細(xì)胞的生長(zhǎng)。M T T 法顯示濃度為3 pm o l ／L 、6 u m o l ／L 、1 2i

3、 x m o l ／L 、2 4 l a m o l ／L 、4 8 l a m o l ／L 和9 6 u m o l ／L 的積雪草甙分別作用6 h 、2 4 h 和4 8 h 后，細(xì)胞的抑制率分別隨藥物濃度的升高和時(shí)間的延長(zhǎng)而升高，呈時(shí)間劑量依賴(lài)性。不同濃度積雪草甙作用后，倒置顯微鏡及H E 染色法證實(shí)腫瘤細(xì)胞形態(tài)呈凋亡特征性改變。T U N E L 法可檢測(cè)到細(xì)胞內(nèi)呈棕黃色顆粒的凋亡細(xì)胞。濃度為6 l a m o l ／L 、1

4、 2 p m o l ／L 、2 4 u m o l ／L 和4 8 1 ．t m o l ／L 的積雪草甙作用6 h后，細(xì)胞凋亡率分別為( 1 ．6 0 土0 ．9 9 ) ％、( 2 ．0 7 士O ．1 6 ) ％、( 3 ．4 1 士O ．3 7 ) ％和( 5 ．7 0士0 ．2 8 ) ％，作用2 4 h 后細(xì)胞凋亡率分別為( 5 ．4 0 土1 ．1 9 ) ％、( 1 4 ．6 8 士1 ．4 1 ) ％、( 2 0 ．

5、1 5 士1 ．5 7 ) ％和( 3 1 ．0 1 士1 ．3 8 ) ％，作用4 8 小時(shí)后凋亡率分別為( 6 ．7 8 士1 ．2 3 ) ％、( 2 1 ．7 7 士1 ．6 4 ) ％、( 3 0 ．5 1 士1 ．1 9 ) ％和( 3 8 ．7 7 士L 2 8 ) ％。積雪草甙作用H e l a 細(xì)胞6 h 一4 8 h 時(shí)，隨著濃度增大，細(xì)胞凋亡率增大，相同濃度下4 8 h 細(xì)胞凋亡率高于2 4 h和6 h ，即呈時(shí)間

6、劑量依賴(lài)性。4 8 l am o l ／L 積雪草甙作用4 8 h 后免疫組化S A B C 檢測(cè)S u r v i v i n 蛋白表達(dá)率為( 4 4 ．2 4 士3 ．2 8 ) ％與對(duì)照組( 8 2 ．1 5 ±5 ．5 1 ) ％相比有顯著性差異( p < 0 ．0 1 ) 。C a s p a s e - 3 蛋白表達(dá)率為( 2 8 ．4 5 士2 ．4 3 ) ％與對(duì)照組( 2 ．1 7 ±1 ．8