3-BrPA逆轉(zhuǎn)肺腺癌細胞的耐藥性研究.pdf

1、癌癥這一難以治愈的疾病無論在發(fā)達還是發(fā)展中國家都會給社會帶來沉重的經(jīng)濟負擔(dān)。在環(huán)境污染及吸煙等因素的作用下，肺癌幾乎已經(jīng)成為男性癌癥患者的主要死因，并且在發(fā)達國家的女性人群中，其病死率已經(jīng)超越乳腺癌躍居惡性腫瘤榜首。
　　眾所周知，手術(shù)切除病灶是肺癌最有效的治療手段，但是臨床上絕大多數(shù)患者明確診斷時分期已經(jīng)偏晚，失去了手術(shù)切除病灶的機會，故針對肺癌患者行之有效的治療方式為化療治療。包含鉑類藥物的治療方案是晚期肺癌化療的標準模式，然

2、而這些方案的治療效果并不令人滿意，其主要原因是順鉑在臨床運用過程中所產(chǎn)生的耐藥性。順鉑耐藥后，多藥耐藥蛋白P-gp等表達相應(yīng)增加，改變順鉑排出和攝取，從而降低細胞中含量，使其不能達到有效濃度。
　　20世紀，Warburg O等研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞在氧氣充足時仍是通過糖酵解的方式獲得生存所需的能量，這一現(xiàn)象被稱為瓦伯格效應(yīng)(Warburg effect)。XURH、PELICANO H等已經(jīng)證實通過阻斷腫瘤細胞的糖酵解過程從而抑制細胞

3、生存所需的ATP能殺死多藥耐藥表型的腫瘤細胞，并且多藥耐藥細胞對3-BrPA這種糖酵解特異性抑制劑很敏感，3-BrPA能增強耐藥細胞(HL-60/AR)對阿霉素、長春新堿、阿糖胞苷等化療藥物的敏感性。因此，3-BrPA作為一種糖酵解抑制劑，為腫瘤界逆轉(zhuǎn)MDR的研究帶來了一個新思路。本研究擬采用3-BrPA作為研究對象觀察其對A549/DDP細胞是否具有耐逆轉(zhuǎn)作用以及探討可能的機制。
　　目的:探究3-BrPA對肺腺癌耐順鉑的A54

4、9/DDP細胞的逆轉(zhuǎn)作用及其可能機制。
　　方法:1.采用CCK-8(cell counting kit-8)法檢測3-BrPA對A549/DDP細胞的增殖抑制作用，由此計算出3-BrPA的最佳耐藥逆轉(zhuǎn)濃度。
　　2.采用CCK8法分別檢測順鉑對A549細胞、A549/DDP細胞及A549/DDP細胞加入3-BrPA后的IC50(half maximal inhibitory concentration)，并根據(jù)公式計算出耐

5、藥倍數(shù)、耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)及相對逆轉(zhuǎn)效率。
　　3.采用Western blot法檢測P-gp分別在A549細胞、A549/DDP細胞以及3-BrPA作用后的A549/DDP細胞上的表達水平，由此觀察3-BrPA對細胞膜P-gp表達的影響。
　　4.采用流式細胞術(shù)檢測不同濃度水平的3-BrPA作用于A549/DDP細胞后細胞內(nèi)Rh123的平均熒光強度(MFI)，由此觀察3-BrPA對細胞膜P-gp功能的影響。
　　結(jié)果:1.

6、3-BrPA對A549/DDP細胞的增殖具有抑制作用，并且呈時間-劑量依賴性，與對照組相比差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，由此算出3-BrPA的最佳耐藥逆轉(zhuǎn)濃度5ug/ml。
　　2.A549細胞及A549/DDP細胞的順鉑IC50分別為6.714ug/ml、38.99 ug/ml，3-BrPA作用后的A549/DDP細胞的順鉑IC50為12.86 ug/ml，由此計算得出A549/DDP細胞的耐藥倍數(shù)為5.81。A549/

7、DDP細胞對順鉑的耐藥性被3-BrPA逆轉(zhuǎn)了3.03倍，相對逆轉(zhuǎn)效率為81％。
　　3.Western blot檢測結(jié)果顯示存在P-gp過表達現(xiàn)象的A549/DDP細胞在加入3-BrPA后，P-gp表達較之前明顯降低。
　　4.流式細胞術(shù)結(jié)果示隨著3-BrPA濃度的遞增，作用后的A549/DDP細胞內(nèi)平均熒光強度(MFI)亦隨之遞增。
　　結(jié)論:1.3-BrPA能以時間-劑量依賴性的方式抑制A549/DDP細胞的生長。