3-BrPA逆轉(zhuǎn)肺腺癌細(xì)胞的耐藥性研究.pdf

1、癌癥這一難以治愈的疾病無(wú)論在發(fā)達(dá)還是發(fā)展中國(guó)家都會(huì)給社會(huì)帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。在環(huán)境污染及吸煙等因素的作用下，肺癌幾乎已經(jīng)成為男性癌癥患者的主要死因，并且在發(fā)達(dá)國(guó)家的女性人群中，其病死率已經(jīng)超越乳腺癌躍居惡性腫瘤榜首。
　　眾所周知，手術(shù)切除病灶是肺癌最有效的治療手段，但是臨床上絕大多數(shù)患者明確診斷時(shí)分期已經(jīng)偏晚，失去了手術(shù)切除病灶的機(jī)會(huì)，故針對(duì)肺癌患者行之有效的治療方式為化療治療。包含鉑類藥物的治療方案是晚期肺癌化療的標(biāo)準(zhǔn)模式，然

2、而這些方案的治療效果并不令人滿意，其主要原因是順鉑在臨床運(yùn)用過(guò)程中所產(chǎn)生的耐藥性。順鉑耐藥后，多藥耐藥蛋白P-gp等表達(dá)相應(yīng)增加，改變順鉑排出和攝取，從而降低細(xì)胞中含量，使其不能達(dá)到有效濃度。
　　20世紀(jì)，Warburg O等研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞在氧氣充足時(shí)仍是通過(guò)糖酵解的方式獲得生存所需的能量，這一現(xiàn)象被稱為瓦伯格效應(yīng)(Warburg effect)。XURH、PELICANO H等已經(jīng)證實(shí)通過(guò)阻斷腫瘤細(xì)胞的糖酵解過(guò)程從而抑制細(xì)胞

3、生存所需的ATP能殺死多藥耐藥表型的腫瘤細(xì)胞，并且多藥耐藥細(xì)胞對(duì)3-BrPA這種糖酵解特異性抑制劑很敏感，3-BrPA能增強(qiáng)耐藥細(xì)胞(HL-60/AR)對(duì)阿霉素、長(zhǎng)春新堿、阿糖胞苷等化療藥物的敏感性。因此，3-BrPA作為一種糖酵解抑制劑，為腫瘤界逆轉(zhuǎn)MDR的研究帶來(lái)了一個(gè)新思路。本研究擬采用3-BrPA作為研究對(duì)象觀察其對(duì)A549/DDP細(xì)胞是否具有耐逆轉(zhuǎn)作用以及探討可能的機(jī)制。
　　目的:探究3-BrPA對(duì)肺腺癌耐順鉑的A54

4、9/DDP細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)作用及其可能機(jī)制。
　　方法:1.采用CCK-8(cell counting kit-8)法檢測(cè)3-BrPA對(duì)A549/DDP細(xì)胞的增殖抑制作用，由此計(jì)算出3-BrPA的最佳耐藥逆轉(zhuǎn)濃度。
　　2.采用CCK8法分別檢測(cè)順鉑對(duì)A549細(xì)胞、A549/DDP細(xì)胞及A549/DDP細(xì)胞加入3-BrPA后的IC50(half maximal inhibitory concentration)，并根據(jù)公式計(jì)算出耐

5、藥倍數(shù)、耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)及相對(duì)逆轉(zhuǎn)效率。
　　3.采用Western blot法檢測(cè)P-gp分別在A549細(xì)胞、A549/DDP細(xì)胞以及3-BrPA作用后的A549/DDP細(xì)胞上的表達(dá)水平，由此觀察3-BrPA對(duì)細(xì)胞膜P-gp表達(dá)的影響。
　　4.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度水平的3-BrPA作用于A549/DDP細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)Rh123的平均熒光強(qiáng)度(MFI)，由此觀察3-BrPA對(duì)細(xì)胞膜P-gp功能的影響。
　　結(jié)果:1.

6、3-BrPA對(duì)A549/DDP細(xì)胞的增殖具有抑制作用，并且呈時(shí)間-劑量依賴性，與對(duì)照組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，由此算出3-BrPA的最佳耐藥逆轉(zhuǎn)濃度5ug/ml。
　　2.A549細(xì)胞及A549/DDP細(xì)胞的順鉑IC50分別為6.714ug/ml、38.99 ug/ml，3-BrPA作用后的A549/DDP細(xì)胞的順鉑IC50為12.86 ug/ml，由此計(jì)算得出A549/DDP細(xì)胞的耐藥倍數(shù)為5.81。A549/

7、DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性被3-BrPA逆轉(zhuǎn)了3.03倍，相對(duì)逆轉(zhuǎn)效率為81％。
　　3.Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示存在P-gp過(guò)表達(dá)現(xiàn)象的A549/DDP細(xì)胞在加入3-BrPA后，P-gp表達(dá)較之前明顯降低。
　　4.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果示隨著3-BrPA濃度的遞增，作用后的A549/DDP細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度(MFI)亦隨之遞增。
　　結(jié)論:1.3-BrPA能以時(shí)間-劑量依賴性的方式抑制A549/DDP細(xì)胞的生長(zhǎng)。