一種新CD44變異體在乳腺癌耐藥細(xì)胞株中表達(dá)及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響.pdf

1、江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文一種新CD44變異體在乳腺癌耐藥細(xì)胞株中表達(dá)及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響姓名：房新建申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：許文林20090604江蘇大學(xué)碩士論丈RTPCR和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后CD44基因、蛋白在MCF一7細(xì)胞中的表達(dá)變化。6透明質(zhì)酸(hyaluronan，HA)處理細(xì)胞24d時(shí)后，收集各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞進(jìn)行RTPCR檢測(cè)，檢測(cè)各組細(xì)胞CD44v，MMP一2及MMP9mRNA表達(dá)情況，并收集細(xì)胞培

2、養(yǎng)上清，離心后進(jìn)行明膠酶譜法分析MMP一2、MMP一9蛋白活性，從而了解CD44v對(duì)MMP一2、MMP9表達(dá)水平的影響。7Transwell檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞侵襲力變化情況。8westernblotting檢測(cè)erk及磷酸化erk(perk)變化，從而探討CD44v調(diào)節(jié)MMP2及MMP9表達(dá)的胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。9顯微計(jì)數(shù)法及流式細(xì)胞術(shù)檢鋇JJCD44v對(duì)MCF。7／CD44v細(xì)胞增殖能力的影響。結(jié)果：1CD44基因在多藥耐藥MCF7／Ad

3、r細(xì)胞中高表達(dá)，而在親代敏感細(xì)胞株MCF7中不表達(dá)。2將該CD44基因克隆入pMDl9一T載體中，經(jīng)TA克隆后進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證，結(jié)果顯示：該CD44v包含CD44基因14號(hào)外顯子、1617號(hào)外顯子、18號(hào)外顯子1205位鹼基；將該基因序列登錄NCBI，基因登錄號(hào)FJ216964。3將CD44v成功克隆入pcDNA31質(zhì)粒中，產(chǎn)生重組質(zhì)粒pcDNA31CD44v，并通過(guò)酶切及DNA測(cè)序驗(yàn)證。4轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pcDNA31CD44v48小時(shí)后，通