阿托伐他汀與氨氯地平對ox-LDL損傷的HUVECs內(nèi)LOX-1和eNOS表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)為研究對象，探討阿托伐他汀與氨氯地平對氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)損傷的HUVECs內(nèi)氧化低密度脂蛋白受體(LOX-1)和內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)表達(dá)的影響。
　　 方法：
　　 1、體外培養(yǎng)HUVECs，采用形態(tài)學(xué)及抗Ⅷ因子抗體免疫熒光法進(jìn)行內(nèi)皮細(xì)胞鑒定。采用倒置顯微鏡觀察內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)變化，取第3-5代對數(shù)生長期的細(xì)胞分組進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。待細(xì)胞生長至融合狀

2、態(tài)時(shí)加入ox-LDL、阿托伐他汀、氨氯地平進(jìn)行干預(yù)。
　　 2、實(shí)驗(yàn)分為5組：①正常對照組：培養(yǎng)基中不加干預(yù)因素；②ox-LDL組：培養(yǎng)基中加入50mg/Lox-LDL培養(yǎng)24h;③阿托伐他汀組：培養(yǎng)基中先加入10umol/L阿托伐他汀培養(yǎng)2h后，再加入50mg/Lox-LDL培養(yǎng)24h;④氨氯地平組：培養(yǎng)基中先加入10umol/L氨氯地平培養(yǎng)2h后，再加50mg/Lox-LDL培養(yǎng)24h;⑤阿托伐他汀+氨氯地平組：培養(yǎng)基中先加

3、入10umol/L阿托伐他汀和10umol/L氨氯地平培養(yǎng)2h后，再加入50mg/Lox-LDL培養(yǎng)24h。
　　 3、運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)檢測各組LOX-1mRNA、eNOSmRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1、倒置顯微鏡下觀察，正常細(xì)胞生長良好，HUVECs剛傳代時(shí)呈圓形，多呈小團(tuán)狀存在,4h后可見部分細(xì)胞貼壁，24h時(shí)，細(xì)胞完全貼壁，邊界清楚，為圓形、梭形或扁平多角形，之后逐漸生長為鋪路石樣

4、鑲嵌排列呈圓形。采用形態(tài)學(xué)及抗Ⅶ抗體免疫熒光法進(jìn)行內(nèi)皮細(xì)胞鑒定，顯微鏡下可見細(xì)胞漿呈較強(qiáng)黃綠色熒光，證實(shí)培養(yǎng)的細(xì)胞為血管內(nèi)皮細(xì)胞。
　　 2、ox-LDL組、阿托伐他汀組、氨氯地平組、阿托伐他汀+氨氯地平組LOX-1mRNA分別是對照組的(3.98±0.21)倍(P＜0.01)、(2.21±0.24)倍(P＜0.01)、(2.46±0.14)倍(P＜0.01)、(1.56±0.15)倍(P＞0.05)；與ox-LDL組比較，阿托

5、伐他汀組、氨氯地平組使LOX-1mRNA表達(dá)明顯減少(P＜0.05)，混合刺激組使LOX-1mRNA表達(dá)顯著減少(P＜0.01)；混合刺激組分別與阿托伐他汀組、氨氯地平組比較，差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。阿托伐他汀組與氨氯地平組比較，差別不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3、ox-LDL組、阿托伐他汀組、氨氯地平組、阿托伐他汀+氨氯地平組eNOSmRNA分別是對照組的(0.346±0.021)倍(P＜0.01)

6、、(0.534±0.039)倍(P＜0.05)、（0.468±0.026）倍(P＜0.05)、(0.946±0.027)倍(P＞0.05)；與ox-LDL組比較，阿托伐他汀組、氨氯地平組使eNOSmRNA表達(dá)明顯增加(P＜0.05)；混合刺激組使eNOSmRNA表達(dá)顯著增加(P＜0.01)；混合刺激組分別與阿托伐他汀組、氨氯地平組比較，差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。阿托伐他汀組與氨氯地平組比較，差別不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05