阿托伐他汀對糖尿病大鼠腎臟eNOS表達(dá)的影響及其可能的腎臟保護(hù)作用.pdf

1、目的：糖尿病腎病（Diabetic Kidney Disease，DKD）是糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)常見的微血管并發(fā)癥之一，晚期可以進(jìn)展至終末腎功能衰竭(end-stage renal failure，ESRF)，導(dǎo)致患者死亡，成為嚴(yán)重危害人類生活質(zhì)量并威脅人類生命的疾病。近年來研究發(fā)現(xiàn)他汀類藥物除突出的降脂作用以外，其對糖尿病患者腎臟的非降脂的保護(hù)作用受到越來越多的關(guān)注。一氧化氮（nitric oxide，N

2、O）作為人體內(nèi)重要的血管舒張因子，可以擴(kuò)張腎小球入球小動脈及出球小動脈，降低腎血管阻力，改善腎小球濾過率和腎臟血流灌注，以維持腎臟良好的血流動力學(xué)狀態(tài)及血管張力。本實驗通過觀察阿托伐他汀對2型糖尿病大鼠腎組織中內(nèi)皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS)表達(dá)水平、NO含量等的影響，探討其是否會通過干預(yù)eNOS-NO通路減慢糖尿病腎病進(jìn)展，從而為他汀類藥物對臨床糖尿病腎臟保護(hù)提供理論依

3、據(jù)。
　　方法：選取160-200g健康清潔級雌性SD大鼠54只，隨機(jī)分為兩組，一組為正常對照組（NC組），另一組為高糖高脂喂養(yǎng)同時聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素（STZ)(30 mg/kg)一次性腹腔注射建立的2型糖尿病大鼠模型組。于實驗第10w末稱取大鼠體重(BW)，取下腔靜脈血標(biāo)本檢測空腹胰島素(FINS)、空腹血糖(FBG)、總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)，并根據(jù)FBG和FINS計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。之后將2型糖

4、尿病大鼠隨機(jī)分為糖尿病組(DM組)和阿托伐他汀干預(yù)組（A組）。每周監(jiān)測血糖、BW。實驗第21w末稱取各組大鼠體重(BW)，取大鼠下腔靜脈血測定FINS、FBG、TC、TG、糖化血紅蛋白(HbA1c)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、肌酐（SCr）、尿素(UREA)，計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)；取出大鼠腎臟后，去除被膜、脂肪等腎臟以外組織后稱取雙腎重量(KW)，計算腎臟指數(shù)（Kidney Index，KI=KW/BW

5、）；腎臟組織石蠟切片行HE染色、PAS染色觀察大鼠腎臟病理改變；取部分腎皮質(zhì)勻漿以硝酸還原法測定NO含量；應(yīng)用real-time PCR檢測腎皮質(zhì)eNOS mRNA含量；免疫組織化學(xué)染色檢測eNOS在腎皮質(zhì)中的表達(dá)。應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)描述用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。兩組間樣本均數(shù)比較采用獨立樣本t檢驗，多組間樣本均數(shù)的多重比較采用LSD、SNK-q、Tamhane檢驗。P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。<

6、br>　　結(jié)果：
　　1 BW變化
　　實驗第10w末，糖尿病大鼠的BW明顯高于NC組大鼠(P<0.05)。第21w末，與NC組比較，DM組大鼠和A組大鼠的BW均明顯下降(P<0.01)；DM組大鼠和A組大鼠相比，體重?zé)o顯著差異(P>0.05)。
　　2血生化指標(biāo)檢測
　　實驗第10w末，糖尿病大鼠的FBG、TG、TC、FINS均明顯高于同期NC組大鼠（P<0.01）。第21w末，DM組和A組大鼠FINS、FBG

7、、TC、TG、HbA1c與同期NC組大鼠相比均明顯升高（P<0.01，P<0.05），而DM組與A組大鼠上述指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；DM組和A組大鼠UREA水平均高于同期NC組大鼠（P<0.05），A組大鼠和DM組大鼠相比，UREA水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；3組大鼠SCr、ALT、AST均無顯著差異（P>0.05）。
　　3胰島素敏感性測定
　　實驗第10w末，糖尿病大鼠的HOMA-IR顯著高于同期

8、NC組（P<0.01），證實糖尿病大鼠存在胰島素抵抗，為2型糖尿病大鼠。第21周末，DM組、A組大鼠HOMA-IR仍顯著高于同期NC組大鼠（P<0.01），DM組與A組相比較HOMA-IR無顯著差異（P>0.05）。
　　4腎臟指數(shù)測定
　　實驗第21w末， DM組和A組大鼠的雙腎重量（KW）和腎臟指數(shù)（Kidney Index，KI=KW(mg)/BW(g)）均明顯高于NC組大鼠（P<0.01）,A組大鼠上述指標(biāo)較DM組大

9、鼠均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　5腎臟病理改變
　　NC組大鼠腎小球及腎小管形態(tài)正常。DM組大鼠腎小球肥大，系膜區(qū)擴(kuò)張，基底膜不規(guī)則增厚，PAS陽性物質(zhì)沉積增多。部分腎小管出現(xiàn)細(xì)胞空泡樣變性，管腔變窄。A組大鼠腎臟病變較DM組稍有減輕，表現(xiàn)為腎小球輕度增大，基底膜輕微增厚，PAS陽性物質(zhì)沉積有所減少，偶可見腎小管細(xì)胞空泡樣變性及管腔變窄。
　　6腎皮質(zhì)NO含量檢測
　　DM組、A組大鼠腎皮質(zhì)NO

10、含量低于同期NC組大鼠（P<0.01）， DM組大鼠腎皮質(zhì)NO含量低于A組大鼠，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　7腎皮質(zhì)eNOS免疫組化染色
　　胞漿中呈棕黃色染色顆粒者為eNOS陽性表達(dá)。DM組和A組大鼠腎皮質(zhì)eNOS表達(dá)均顯著低于NC組大鼠（P<0.01，P<0.05），A組大鼠腎皮質(zhì)eNOS表達(dá)高于DM組大鼠，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　8腎皮質(zhì)eNOS mRNA real-time PCR結(jié)

11、果
　　與 NC組相比，DM組和A組大鼠腎皮質(zhì)中eNOS mRNA含量均降低（P<0.01）；其中A組大鼠eNOS mRNA含量高于DM組大鼠（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1在高糖高脂飲食的基礎(chǔ)上聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素一次性腹腔注射能夠成功建立2型糖尿病大鼠模型，隨著病程的進(jìn)展，其腎臟組織學(xué)改變基本具備人類2型糖尿病腎病的典型病理特征。
　　2與正常對照組相比，糖尿病大鼠腎皮質(zhì)eNOS表達(dá)下降，腎皮質(zhì)中NO含