氟伐他汀對糖尿病大鼠心肌病變的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、研究目的：觀察氟伐他汀對糖尿病大鼠心肌病變的保護(hù)作用，并探討氟伐他汀對糖尿病大鼠心肌病變保護(hù)作用的機(jī)制。
　　 方法：選用SD雄性大鼠120只，隨機(jī)挑選10只作為正常對照組，其余采用STZ(65mg/kg)腹腔注射誘導(dǎo)1型糖尿病大鼠模型。造模成功后隨機(jī)分為6組：糖尿病心肌病模型對照組(DC)，氟伐他汀低、中、高劑量(2、6、18mg.Kg-1·d-1)治療組，每日灌胃，氟伐他汀中劑量+胰島素組(6mg.Kg-1+2U·kg-1·

2、d-1)每日灌胃并皮下注射精蛋白鋅胰島素，胰島素治療組(2U·kg-1·d-1)，每日皮下注射精蛋白鋅胰島素，正常對照及模型組給予等量生理鹽水灌胃。連續(xù)給藥8周，期間觀察大鼠的一般情況、體重及血糖。末次給藥24小時(shí)后以水合氯醛(0.36g/kg)腹腔注射麻醉大鼠，用BL-420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)信號采集處理系統(tǒng)記錄大鼠Ⅱ?qū)?lián)心電圖，然后經(jīng)右頸總動脈行左心室插管，用BL-420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)信號采集處理系統(tǒng)記錄左室收縮壓(LVSP)、左室

3、舒張末期壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓變化速率(±d p/ dtmax)和左室內(nèi)壓上升達(dá)最大速率所需時(shí)間(t-dp /dt)等心功能指標(biāo)。完成壓力曲線記錄后頸總動脈取血處死大鼠，分離血清-20℃保存待用。迅速開胸取心臟、游離左心室分別稱重。計(jì)算全心相對重量(心臟指數(shù))、左心室相對重量(左心室指數(shù))。并取左心室前壁心肌組織固定，采用HE、PAS、VG染色在光鏡下觀察病理改變并行透射電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)改變，免疫組化方法觀察蛋白激酶C(PKC)的

4、表達(dá)。應(yīng)用生化法檢測血清中甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)及肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)量；測定心肌組織中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、Ca2+-ATP酶(Ca2+-ATPase)的活力，及丙二醛(MDA)的含量。
　　 結(jié)果：
　　 1.氟伐他汀對糖尿病大鼠一般情況、體重及血糖的影響實(shí)驗(yàn)期間與正常組比較，模型組大鼠逐漸出現(xiàn)消瘦、多飲多尿、對外界反應(yīng)遲鈍

5、,小便腥臊酮臭、大便塘?。欢嘁娖つw潰瘍、白內(nèi)障、腸梗阻等。與模型組比較，氟伐他汀各劑量組也出現(xiàn)消瘦、多飲多尿、小便腥臊酮臭等，但對外界反應(yīng)相對靈敏，且白內(nèi)障，皮膚破損潰瘍及腸梗阻的發(fā)生明顯減少。氟伐他汀中劑量+胰島素治療組和胰島素組動物一般狀況明顯改善，體重增加，毛色恢復(fù)光澤，反應(yīng)靈敏，但仍不及正常組。
　　 實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)8周后，與正常組比較，糖尿病模型組大鼠體重明顯降低，血糖明顯升高(P＜0.05)。與模型組比較氟伐他汀各治療

6、組血糖和體重改變不明顯(P＞0.05)胰島素干預(yù)組體重明顯增加(P＜0.05)、空腹血糖與正常組無明顯差異(P＞0.05)。
　　 2.氟伐他汀對糖尿病大鼠心電圖及心臟功能的影響觀察Ⅱ?qū)?lián)心電圖，與正常組比較，模型組大鼠心電圖QRS波出現(xiàn)嚴(yán)重的高電壓波形并且ST段明顯抬高；氟伐他汀各劑量組及胰島素組大鼠心電圖較模型組相比QRS波幅不同程度的降低，ST段抬高幅度也有不同程度下降。
　　 與正常組比較，模型組左室收縮壓(LV

7、SP)、左室內(nèi)壓變化速率(±d p/ dtmax)和左室內(nèi)壓上升達(dá)最大速率所需時(shí)間(t-dp /dt)等心功能指標(biāo)顯著下降而左室舒張末期壓(LVEDP)明顯升高(P＜0.05，P＜0.01)。與模型組比較，氟伐他汀各劑量組及胰島素組心功能各項(xiàng)指標(biāo)均有不同程度改善，其中氟伐他汀中劑量+胰島素治療組和胰島素組LVSP、LVEDP、+dp /dtmax、-dp /dtmax和室內(nèi)壓上升達(dá)最大速率所需時(shí)間(t-dp /dt)均明顯好轉(zhuǎn)(P＜0.

8、05，P＜0.01)并且與正常組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 3.氟伐他汀對糖尿病大鼠心室重塑的影響與正常組比較，模型組大鼠心臟指數(shù)和左心室指數(shù)明顯升高(P＜0.01)。與模型組比較氟伐他汀各劑量組左心室指數(shù)減小，尤以氟伐他汀中劑量組、氟伐他汀中劑量+胰島素組及胰島素組改善最為明顯(P＜0.05，P＜0.01)。
　　 4.氟伐他汀對糖尿病大鼠病理檢查結(jié)果的影響光鏡下HE染色可見：模型組大鼠心肌可見變性、壞死

9、(淡染)的心肌細(xì)胞。細(xì)胞核深染且大小不均勻。氟伐他汀低劑量組改善不明顯，其余各組心肌纖維病變不多見，排列較整齊，心肌細(xì)胞邊緣清晰，細(xì)胞核形狀、染色正常。
　　 PAS染色可見：正常組大鼠心肌組織中只有極少量PAS陽性物質(zhì)沉積，模型組心肌組織中可見大量深染PAS陽性物沉積，氟伐他汀低劑量組PAS沉積略少于模型組，中、高劑量組及胰島素組PAS陽性物質(zhì)明顯減少，淡染；氟伐他汀中劑量+胰島素組及胰島素組PAS陽性物沉積與正常組比較增多不

10、明顯。
　　 VG染色發(fā)現(xiàn)：正常組大鼠心肌小動脈外膜有少量膠原沉積，模型組心肌膠原纖維增生、分布不均勻，排列紊亂，氟伐他汀低劑量組與模型組比較，改變不明顯，其余治療組膠原纖維輕度增生，分布較均勻。
　　 電鏡下觀察顯示：正常組心肌纖維結(jié)構(gòu)完整，肌小節(jié)排列整齊，線粒體無增生，線粒體膜完整，無空泡樣變，嵴正常。心肌細(xì)胞核染色質(zhì)分布均勻，橫紋清楚。閏盤正常，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞正常，管腔開放。模型組心肌纖維水腫或斷裂，肌小節(jié)失去正

11、常結(jié)構(gòu)，線粒體大量增生且出現(xiàn)大量空泡樣損害，線粒體嵴斷裂或消失。心肌細(xì)胞核固縮，染色質(zhì)邊集，呈鋸齒狀，細(xì)胞核閏盤間隙增寬，心肌毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生明顯，管腔淤血。氟伐他汀低劑量組與模型組比較改善不明顯，中、高劑量組心肌細(xì)胞損傷明顯減輕，肌小節(jié)排列尚可，線粒體增生及病變較前減少，心肌細(xì)胞核染色質(zhì)分布較均勻。氟伐他汀中劑量+胰島素及胰島素組，偶見空泡樣變線粒體，核輕度固縮，其余與正常組近似。
　　 5.氟伐他汀對糖尿病大鼠血清中TG

12、、CK等的影響與正常組比較，模型組大鼠血清中TG、TC顯著升高(P＜0.01，P＜0.05)，HDL顯著降低(P＜0.01，P＜0.05)。氟伐他汀各劑量組與模型組比較，血清中TG、TC顯著下降(P＜0.01，P＜0.05)其中中劑量組、中劑量+胰島素組與正常組無明顯差異(P＞0.05)，而HDL升高不明顯(P＞0.05)。
　　 與正常組比較，模型組大鼠血清中CK、LDH均明顯升高(P＜0.01)，氟伐他汀各劑量組與模型組比較

13、，CK、LDH均明顯下降(P＜0.05)以中、高劑量組及中劑量+胰島素組為甚(P＜0.01)，且與正常組無明顯差異(P＞0.05)，胰島素組下降不明顯(P＞0.05)。
　　 6.氟伐他汀對糖尿病大鼠心肌組織中SOD、GSH-PX等的影響與正常組比較，模型組大鼠心肌組織中SOD、GSH-PX、Ca2+-ATPase活力明顯下降，MDA含量明顯升高(P＜0.01)；氟伐他汀各治療組與模型組比較，SOD、GSH-PX、Ca2+-AT

14、Pase活力有所增強(qiáng)，其中氟伐他汀中、高劑量組及中劑量+胰島素組SOD、GSH-PX與正常組無明顯差異(P＞0.05)，MDA含量較模型組明顯下降(P＜0.01，P＜0.05)。
　　 7.氟伐他汀對糖尿病大鼠心肌PKC表達(dá)的影響與正常組比較，模型組大鼠心肌PKC平均光密度值明顯升高(P＜0.01)，與模型組比較除氟伐他汀低劑量組外，氟伐他汀各劑量組及胰島素組PKC平均光密度值明顯下降(P＜0.01，P＜0.05)，且與正常組比