氟伐他汀對哮喘大鼠氣道重建的影響及其機(jī)制.pdf

1、研究背景支氣管哮喘是一種以氣道高反應(yīng)性、氣道炎癥和氣道重建為特征的慢性呼吸道疾病，目前已在世界范圍內(nèi)成為引起肺功能損害的重要疾病之一。最近的研究表明，哮喘氣道重建是造成哮喘難以治愈的主要原因。大量的研究表明：在受到特定的外界環(huán)境激發(fā)后，哮喘患者氣道中所產(chǎn)生的大量炎癥介質(zhì)可以刺激體外培養(yǎng)的氣道平滑肌細(xì)胞增殖，并使其表達(dá)多種細(xì)胞粘附分子和分泌大量細(xì)胞因子。而且，在慢性哮喘患者的氣道中，氣道重建的進(jìn)程會因氣道平滑肌細(xì)胞的持續(xù)增生而不斷加強(qiáng)。因

2、此，為了達(dá)到臨床控制哮喘的目的，抑制哮喘氣道重建的過程變得越發(fā)關(guān)鍵。 他汀類藥物是一種人工合成的新的HMG-CoA 抑制劑，這類藥物的藥理作用目前已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出了其原有的調(diào)脂作用。其中就包括了通過抑制異戊二烯化必須基團(tuán)的合成而降低ras 相關(guān)蛋白的活性，從而抑制細(xì)胞增殖的作用。最新的研究提示，脂溶性的HMG-CoA 抑制劑可以在體外實(shí)驗(yàn)中部分抑制血管緊張素－Ⅱ所誘導(dǎo)的新生兒心肌細(xì)胞的增生，這種作用已經(jīng)被證明是通過抑制了p21ras

3、/蛋白激酶A 途徑而實(shí)現(xiàn)的。癌基因ras 表達(dá)的GTP－耦聯(lián)蛋白p21ras 與細(xì)胞增殖密切相關(guān)，其生物活性高低取決于其細(xì)胞膜定位。而膜定位所必須的異戊二烯化過程則有賴于羥甲基戊二酰輔酶A 復(fù)合物的生成。既往的研究已經(jīng)證實(shí)：可以通過減少甲羥戊酸的生成抑制HMG-CoA 復(fù)合物的形成，進(jìn)而干預(yù)ras 基因表達(dá)的GTP-耦聯(lián)蛋白的生物活性。目前，關(guān)于HMG-CoA 抑制劑在體內(nèi)是如何作用于ras 系統(tǒng)和其下游細(xì)胞增殖周期的調(diào)節(jié)因子的問題，尚

4、未得出明確的結(jié)論。 第一部分 目的：觀察羥甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑氟伐他汀對大鼠哮喘模型氣道重建的影響。 方法：將40 只SD 雄性大鼠隨機(jī)分為4 組：空白對照組(A 組)，哮喘組(B 組)，地塞米松組(C 組)，氟伐他汀組(D 組)。以10g/L 卵白蛋白(Ovalbumin ，OVA)腹腔注射致敏并長期吸入激發(fā)制備慢性哮喘模型.用免疫組織化學(xué)方法檢測各組大鼠肺組織中PCNA，p21ras

5、 和Ⅲ型膠原的表達(dá)，同時圖象分析方法測量氣道壁內(nèi)周長，平滑肌面積。 結(jié)果：①氟伐他汀對氣道重建具有抑制作用:D 組的Wam /Pi、Ⅲ型膠原和PCNA 表達(dá)分別為4.44±0.95μm2/μm 、32±6 和38±10，明顯低于B組[(7.01±1.54) μm2/μm， 55±8， 68±12] ，p 均<0.05; ②氟伐他汀組對氣道重建的抑制作用弱于地塞米松組:D 組的Wam/Pi，Ⅲ型膠原和PCNA 表達(dá)水平高于C 組[

6、(3.14±1.06)μm2/μm，21±6，26±6] (p<0.05);③D 組p21ras 表達(dá)的吸光度值(24±11)明顯低于B 組(57±10) (P<0.05)。P21ras 表達(dá)與PCNA和Ⅲ型膠原的表達(dá)分別呈正相關(guān)(rs =0.685， rs=0.530，P 均<0.05)。 結(jié)論：氟伐他汀可延緩哮喘氣道重建的進(jìn)程，這種作用與p21ras 抑制相關(guān)，但其抑制增生的作用弱于地塞米松。 第二部分 目的

7、: 探討氟伐他汀對哮喘氣道平滑肌增生的影響。 方法：大鼠氣道平滑肌細(xì)胞(ASMC)復(fù)蘇，傳代培養(yǎng)，MTT 法觀察細(xì)胞增殖狀況，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期變化。 結(jié)果：氟伐他汀對由組胺、血清刺激增生的ASMC 有明顯的抑制作用，這種抑制作用具有劑量和時間的依賴性。MTT 法檢測A490nmFlu 組明顯低于同時間點(diǎn)對照組(P<0.05)， 10 -4mol·L -1 Flu 組（0.31±0.02）與2×10-6 mol·L-