瑞舒伐他汀對ox-LDL誘導(dǎo)的人單核巨噬細(xì)胞MMP-9mRNA和蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景和目的：氧化低密度脂蛋白（Oxidized low density lipoprotein，Ox-LDL)作為獨(dú)立的危險因素在動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）的發(fā)生、發(fā)展及急性冠脈綜合征（Acute coronary syndrome, ACS）形成中占有重要的地位，在動脈粥樣硬化中ox-LDL除了直接導(dǎo)致內(nèi)皮損傷外，還可以引起單核細(xì)胞趨化、巨噬細(xì)胞源泡沫細(xì)胞形成和細(xì)胞毒性產(chǎn)生,并且可以調(diào)節(jié)粥樣斑塊內(nèi)血管內(nèi)皮

2、細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等多種細(xì)胞和生長因子的合成[1]。有研究發(fā)現(xiàn),ox-LDL 可增加單核細(xì)胞源巨噬細(xì)胞MMP-9的蛋白表達(dá)并增強(qiáng)其活性，是細(xì)胞功能和基因表達(dá)的主要調(diào)節(jié)因子[2]。Ox-LDL 可刺激人單核巨噬細(xì)胞MMP-9的基因表達(dá)，增加基質(zhì)金屬蛋白酶的活性，有可能促進(jìn)粥樣硬化斑塊內(nèi)基質(zhì)的降解，形成易損的斑塊，并且，在ox-LDL 存在下, MMP-9表達(dá)維持在較高水平，MMP-9 過度的表達(dá)則抑制平滑肌增殖，促使其凋亡，減弱斑

3、塊穩(wěn)定性,參與了斑塊破裂的進(jìn)程，促進(jìn)粥樣硬化病變和血栓的形成。瑞舒伐他汀(Rosuvastatin)是新一代的HMG-COA還原酶抑制劑,能顯著降低低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、甘油三脂(TG)及升高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C),是一種被攝入后易于進(jìn)入動脈內(nèi)膜的抗氧化質(zhì)，它對ox-LDL所誘導(dǎo)的單核巨噬細(xì)胞（Monocyte-macrophage cells）表達(dá)MMP-9mRNA和蛋白的影響及其機(jī)制尚不十分明確。目的：討瑞舒伐

4、他汀對ox-LDL 誘導(dǎo)的健康人單核巨噬細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)mRNA及蛋白表達(dá)的影響及影響途徑和可能機(jī)制。
　　 研究方法：體外密度梯度離心法分離并培養(yǎng)健康人血中的單核巨噬細(xì)胞，用特異性熒光素標(biāo)記的CD14細(xì)胞表面抗體,流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞鑒定，并傳至2—4代用于實(shí)驗(yàn)單核巨噬細(xì)胞培養(yǎng)24 h作為空白對照組,ox-LDL 100mg/mL培養(yǎng)24 h作為ox-LDL對照組,實(shí)驗(yàn)組分別用ox-LDL 100mg/mL培

5、養(yǎng)2 h后，各加入不同劑量瑞舒伐他汀(0.010.11.010.0umol/L)共同作用24 h。分別提取各組細(xì)胞的RNA，用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(RT-PCR)，測定MMP-9 mRNA表達(dá)，用ELISA法測定MMP-9的蛋白含量。
　　 研究結(jié)果：單核巨噬細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)?誘導(dǎo)后,25×16倍倒置顯微鏡光鏡下觀察,部分細(xì)胞為多角形,并且易于聚積?貼壁,說明已由單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞，經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞鑒定,鑒定細(xì)胞多為單

6、核巨噬細(xì)胞,符合實(shí)驗(yàn)要求，對ox-LDL誘導(dǎo)的單核巨噬細(xì)胞MMP-9 mRNA表達(dá)的影響與空白對照組比較,ox-LDL對照組MMP-9 mRNA表達(dá)明顯增加(P<0.05)，與空白對照組比較,ox-LDL誘導(dǎo)后不同劑量（0.01μmol/L，0.1μmol/L，1.0μmol/L;10.0μmol/L)瑞舒伐他汀組MMP-9 mRNA表達(dá)也增加(P<0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;與ox-LDL對照組比較,不同劑量瑞舒伐他汀組MMP-9

7、mRNA表達(dá)明顯降低(P<0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;ox-LDL誘導(dǎo)后,不同劑量瑞舒伐他汀各組之間比較,隨著瑞舒伐他汀劑量增加,MMP-9 mRNA表達(dá)逐漸降低(P<0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義?對ox-LDL誘導(dǎo)的單核巨噬細(xì)胞MMP-9蛋白表達(dá)的影響與空白對照組比較,ox-LDL對照組MMP-9蛋白表達(dá)明顯增加(P<0.05)。與ox-LDL對照組比較,不同劑量(0.01μmol/L，0.1μmol/L，1.0μmol/L?1

8、0.0μmol/L)瑞舒伐他汀組MMP-9蛋白表達(dá)明顯降低(P<0.05),這種降低隨著瑞舒伐他汀劑量的增加而愈加顯著; ox-LDL誘導(dǎo)后,不同劑量瑞舒伐他汀組之間比較,隨著瑞舒伐他汀劑量增加,MMP-9蛋白表達(dá)逐漸降低(P<0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;ox-LDL誘導(dǎo)后加入不同劑量瑞舒伐他汀,除了瑞舒伐他汀10.0μmol/L組與與空白對照組比較,MMP-9蛋白表達(dá)沒有增加(P>0.05),差異無統(tǒng)計學(xué)意義外,其余各劑量(0.0

9、1μmol/L，0.1μmol/L，1.0μmol/L)組與空白對照組比較,MMP-9蛋白表達(dá)均增加,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表1)?說明瑞舒伐他汀10.0μmol/L幾乎完全抑制了MMP-9蛋白的表達(dá)。
　　 研究結(jié)論：
　　 （1）證實(shí)外周血單核巨噬細(xì)胞在ox-LDL 誘導(dǎo)后,MMP-9 mRNA和蛋白含量明顯增加。
　　 （2）瑞舒伐他汀呈劑量依賴性,可能通過ox-LDL 途徑來下調(diào)人單核巨噬