SAA對THP-1巨噬細胞SR-BI和炎癥因子表達的影響及其機制探討.pdf

1、目的：B類I型清道夫受體(scavenger receptor class B typeI,SR-BI)是介導(dǎo)膽固醇逆轉(zhuǎn)運(reverse cholesterol transport,RCT)最重要的膜蛋白之一，它對動脈粥樣硬化（atherosclerosis, As）有保護作用。最新研究發(fā)現(xiàn)，炎癥反應(yīng)能影響RCT，進而影響周圍血管膽固醇外流及As的發(fā)生發(fā)展。血清淀粉樣蛋白A(serum amyloid-a, SAA)能誘導(dǎo)人體巨噬細胞

2、炎癥反應(yīng)，顯著增加脂多糖（lipopolysaccharides, LPS）誘導(dǎo)的炎癥產(chǎn)物IL-10，TNF-α，和IL-6的表達，且能抑制高密度脂蛋白的抗炎作用,促進As的進展。本實驗主要觀察SAA對THP-1巨噬細胞SR-BI及炎癥反應(yīng)表達調(diào)節(jié)的影響，并探討其相關(guān)機制。
　　方法：培養(yǎng)THP-1細胞株，用160 nmol/L的佛波酯（phorbol12-myristate13-acetate， PMA）刺激細胞12小時，使其誘

3、導(dǎo)分化為巨噬細胞，換無血清培養(yǎng)基，分小組以不同濃度的SAA（0，100，200，400，800 ng/ml）處理 THP-1巨噬細胞24小時，或以400ng/ml的SAA處理細胞不同時間（0，4，8，16，32小時），或以400 ng/ml的SAA分別與P38激動劑(anisomycin)或抑制劑(SB203580)共同處理細胞24小時，分別采用RT-PCR檢測SR-BImRNA的表達，Western blot檢測磷酸化P38蛋白的表達

4、，Western blot及細胞免疫組織化學(xué)方法檢測細胞SR-BI的表達，ELISA檢測炎癥因子（MCP-1、TNF-α、IL-1β）的表達。
　　結(jié)果：與空白對照組相比，SAA處理細胞后，炎癥因子（MCP-1、TNF-α、IL-1β）的表達上調(diào)，而SR-BI mRNA及蛋白質(zhì)的表達受到抑制，這種效應(yīng)呈濃度和時間依賴性，并且磷酸化P38蛋白質(zhì)的表達也上調(diào)；與SAA單獨處理組比較，SAA與P38激動劑共同處理細胞后，其SR-BI表達

5、下調(diào)，炎癥因子及磷酸化P38蛋白表達增加；而SAA與P38抑制劑共同處理細胞后，其SR-BI表達相對增加，炎癥因子及磷酸化P38蛋白表達相對減少。
　　結(jié)論：SAA增加THP-1巨噬細胞炎癥因子（MCP-1、TNF-α、IL-1β）的表達，抑制SR-BI的表達，促進THP-1巨噬細胞炎癥反應(yīng)；SAA的作用可能與P38蛋白的磷酸化有關(guān)，P38-MAPK信號途徑可能參與了SR-BI的表達調(diào)節(jié)及SAA刺激的THP-1巨噬細胞炎癥反應(yīng)。S