丹紅、CRP對THP-1源巨噬細胞MMP-1表達的影響及機制.pdf

1、背景及目的:急性冠脈綜合癥(ACS acute coronary syndrome)是心血管病急癥之一,其共同病理生理學(xué)基礎(chǔ),即在冠狀動脈粥樣硬化基礎(chǔ)上,發(fā)生斑塊破裂或糜爛、潰瘍、并發(fā)血栓形成、血管收縮、微血管栓塞等導(dǎo)致急性或亞急性的心肌供氧減少。研究表明斑塊破裂除與炎癥、血管內(nèi)皮功能障礙、血流動力學(xué)不穩(wěn)定、平滑肌細胞(VSMC Smooth muscle cells)增殖和功能改變、細胞凋亡等有關(guān)外,還與基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPS Ma

2、trix metalloproteinases)分解細胞外基質(zhì)(ECM Extracellular matrix),C反應(yīng)蛋白(CRP C-reactive protein)增加具有相關(guān)性。目前已證實巨噬細胞和CRP及MMPS在斑塊中發(fā)揮了重要作用。中藥丹紅可能具有增加冠脈血流量,降低心肌耗氧量,抗心肌缺血和降低血液黏稠度等作用。通過上述;丹紅、CRP、MMPS之間是否存在某些聯(lián)系?本文主要通過探討CRP對THP-1源性巨噬細胞基質(zhì)金屬

3、蛋白酶-1(MMP-1 Matrix meta1loproteinases-1)的蛋白和mRNA表達及相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路NF-KB的影響,同時觀察中藥丹紅對MMP-1的表達影響。深入了解ACS的發(fā)生、發(fā)展和發(fā)病機制、以及中藥丹紅對ACS患者的保護作用。
　　方法:RPMI1640培養(yǎng)基體外培養(yǎng)人單核細胞白血病細胞(THP-l細胞),待數(shù)量達到5.0×106個/ml時,分別接種6孔板。采用佛波醇(PMA Phorbol12-myris

4、tate13-acetate)將THP-1細胞誘導(dǎo)分化成巨噬細胞,用酶聯(lián)免疫吸附實驗法(ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay)測定巨噬細胞細胞6、12、24、48、72小時MMP-1蛋白表達時間,確定巨噬細胞分泌MMP-1峰值時間。再將其分為對照組、CRP干預(yù)組、BAY-117085干預(yù)組(CRP+通道抑制劑BAY-117085)、丹紅干預(yù)組。ELISA測定不同組別細胞培養(yǎng)上清液中MMP-1蛋白

5、濃度,再用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR Reverse transcription-polymerase chain reaction)法測定 CRP和BAY-117085干預(yù)組MMP-1的mRNA表達。比較分析MMP-1蛋白濃度和mRNA表達的情況。
　　結(jié)果:在顯微鏡下觀察到細胞株THP-1在佛波醇誘導(dǎo)下轉(zhuǎn)化為巨噬細胞,24小時細胞上清液MMP-1表達到峰值。與對照組相比,CRP干預(yù)組 MMP-1蛋白和mRNA表達升高,

6、5mg/L、10mg/L、25 mg/L、50mg/L CRP時MMP-1表達逐漸增高(P＜0.05),呈劑量依賴性升高水平。BAY-117085干預(yù)組MMP-1的表達高于對照組(P＜0.01)但低于CRP(50mg/L)組(P＜0.01),BAY-117085干預(yù)組未完全降低MMP-1表達水平,丹紅干預(yù)組MMP-1的表達降低(P＜0.05)。組內(nèi)比較CRP呈濃度依賴性促進MMP-1表達, BAY-117085干預(yù)組部分阻斷了CRP對M

7、MP-1表達的促進作用,丹紅濃度分別為0ul/ml、200ul/ml、400ul/ml、800ul/ml、1600ul/ml、3200ul/ml時MMP-1呈平臺性降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論:PMA在48小時能完全誘導(dǎo)懸浮THP-1細胞轉(zhuǎn)變貼壁的巨噬細胞,CRP能在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平誘導(dǎo)THP-1源巨噬細胞表達MMP-1,這種調(diào)節(jié)作用可能通過NF-KB信號通路實現(xiàn)的。丹紅能顯著抑制MMP-1的表達,可能對穩(wěn)定動脈粥樣斑塊具有一