β2-gpⅠ對THP-1源性巨噬細胞吞噬凋亡IL-60細胞的影響.pdf

1、目的：研究β2-糖蛋白I(β2-gp I)對THP-1來源的巨噬細胞吞噬凋亡HL-60細胞的影響，并探討其作用機制。
　　 方法：體外培養(yǎng)人急性髓系白血病細胞株HL-60，用阿糖胞苷(Ara-C)誘導其凋亡并用MTT法和AnnexinV-PI聯(lián)合染色法檢測細胞生長抑制率和凋亡情況；體外培養(yǎng)人急性單核細胞白血病細胞株THP-1，用佛波酯(PMA)誘導其分化為吞噬細胞，流式細胞儀檢測誘導分化后細胞表面抗原CD11b表達情況以確定分化

2、程度，墨汁吞噬實驗檢測分化后細胞的吞噬能力；ELISA法檢測PS與β2-gp I的特異結合情況；流式細胞儀檢測β2-gp I與AnnexinV競爭結合磷脂酰絲氨酸(PS)情況；在β2-gp I存在的條件下，觀察其對吞噬細胞吞噬凋亡細胞的吞噬率影響。
　　 結果：⑴Ara-C體外誘導HL-60細胞凋亡：不同濃度Ara-C分別作用HL-60細胞24、48小時后，細胞出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)：細胞體積變小，細胞核固縮變小或碎裂，染色質濃縮或

3、邊集等。MTT法檢測細胞生長抑制率結果顯示細胞生長抑制率隨著藥物濃度增加而增大，流式細胞儀檢測凋亡率顯示隨著Ara-C濃度的增加，早期凋亡率和晚期凋亡率逐漸增大。Ara-C濃度為800ug/ml作用HL-60細胞48h后，細胞生長抑制率達到72.50±1.64％，早期凋亡率和晚期凋亡率分別達到19.35±0.44％，53.56±2.90％，細胞抑制率和凋亡率遠大于對照組(P<0.05)。⑵PMA誘導THP-1細胞分化為巨噬細胞：150n

4、g/ml PMA誘導THP-1細胞72h后，細胞形態(tài)上出現(xiàn)明顯變化：細胞體積增大，形態(tài)不規(guī)則伸出偽足。流式細胞儀檢測誘導48h后細胞表面CD11b表達水平顯示：50、100、150、200ng/ml PMA誘導后細胞表面CD11b陽性率分別為17.71±0.49％、18.77±0.66％、22.93±0.53％、21.29±0.87％，實驗組CD11b陽性率均明顯高于對照組(P<0.05)。PMA誘導72h后，上述各濃度組CD11b陽性

5、率分別為43.89±1.64％、49.14±0.72％、54.88±1.73％、52.11±0.81％。相同濃度PMA誘導72h細胞表面CD11b陽性率均比誘導48h的陽性率顯著增高(P<0.05)。吞噬能力檢測顯示用150ng/ml PMA誘導THP-1細胞72h后，吞噬能力達到90％以上。⑶PS與β2-gP I的特異性結合：ELISA實驗結果顯示實驗組OD值>臨界值，結果陽性，說明β2-gP I可以與PS特異性結合。⑷β2-gP I

6、與AnnexinV競爭結合磷脂酰絲氨酸(PS)：流式細胞儀檢測結果顯示：隨著β2-gP I濃度的增加，AnnexinV與早期凋亡細胞的結合率逐漸降低。加入AnnexinV避光反應40min后，無β2-gP I時，AnnexinV(+)PI(-)率為22.72％，加入β2-gP I100ul、200ul、400 ul后AnnexinV(+)PI(-)率分別為21.43％、13.15％、8.51％，加β2-gP I前后比較差異有顯著性意義(

7、P<0.05)。β2-gP I可以與AnnexinV競爭結合同一位點即PS。β2-gP I與早期凋亡細胞的結合率隨著時間的增加有所降低。⑸β2-gP I對吞噬率的影響：無β2-gP I時吞噬細胞的吞噬率為10.5％，分別加入50ug/ml、100ug/ml、150 ug/mlβ2-gP I后吞噬率為16.8％、33.6％、42.7％，加入β2-gP I后與無β2-gP I時比較吞噬率增加。
　　 結論：β2-gP I可以和凋亡細