TNF-α對THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞ABCA1表達的影響及其機制研究.pdf

1、第一部分TNF-α對THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞內(nèi)膽固醇含量及ABCA1表達的影響 目的：探討炎癥因子TNF-α對THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞ABCA1介導(dǎo)的細胞膽固醇流出途徑的影響。 方法：采用人THP-1細胞誘導(dǎo)分化形成的泡沫細胞，測定TNF-α與細胞內(nèi)膽固醇含量變化的時間、濃度關(guān)系。然后選擇合適濃度的TNF-α刺激不同時間，隨機將泡沫細胞分成對照組、TNF-α組，以RT-PCR法、Westernblot法測定細

2、胞ABCA1的表達。 結(jié)果：TNF-α增加THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞內(nèi)膽固醇含量呈時間、濃度效應(yīng)，各濃度組12h后細胞內(nèi)膽固醇含量與0h比較明顯升高(p＜0.05)，在10ng/ml時，TNF-α增加細胞內(nèi)膽固醇含量達到飽和效應(yīng)。10ng/mlTNF-α刺激后以時間依賴方式下調(diào)ABCA1mRNA和蛋白水平。 結(jié)論：炎癥因子TNF-α可通過抑制THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞ABCA1的表達而減少細胞膽固醇的流出，從而加

3、重細胞內(nèi)膽固醇的蓄積。 第二部分NF-κB活化在TNF-α下調(diào)THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞ABCA1表達中的作用 目的：探討NF-κB活化在THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞ABCA1表達中的作用。方法體外培養(yǎng)THP-1細胞并構(gòu)建泡沫細胞模型，使用TNF-α和NF-κB活化抑制劑TPCK孵育細胞，以RT-PCR法、Western法測定THP-1源性泡沫細胞ABCA1mRNA和蛋白表達情況，借助SandwichELISA法觀

4、察核因子κB活化/核易位情況。 結(jié)果：TNF-α可即刻激活NF-κB，并導(dǎo)致干預(yù)24h后泡沫細胞ABCA1mRNA和蛋白表達下調(diào)；若預(yù)先用TPCK孵育，則TPCK可抑制TNF-α對NF-κB的激活，且24h后泡沫細胞ABCA1mRNA和蛋白表達下調(diào)幅度減?。籘PCK延遲孵育則對TNF-α的效應(yīng)抑制不顯著。 結(jié)論：炎癥因子TNF-α可即刻激活NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，早期活化的NF-κB可阻遏THP-1源泡沫細胞ABCA1基