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文檔簡介
1、目的：Vaspin（內(nèi)臟脂肪組織來源的絲氨酸蛋白酶抑制物）被證實(shí)能對抗動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展，其具體作用機(jī)制尚未被完全認(rèn)識。本研究主要探討Vaspin能否通過抑制NF-κB途徑上調(diào)THP-1巨噬細(xì)胞ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1（ATP-binding cassette transporter A1， ABCA1）表達(dá)。
方法：將人THP-1單核巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)轉(zhuǎn)變成為泡沫細(xì)胞，經(jīng)不同濃度的Vaspin處理相同時(shí)間或同一濃度Vaspin(1
2、00ng/mL)處理不同時(shí)間(0,6,12,24,48h)，用液體閃爍計(jì)數(shù)法檢測細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出,油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴情況，高效液相色譜法測定細(xì)胞內(nèi)總膽固醇、游離膽固醇及膽固醇酯含量；Western blot測定細(xì)胞內(nèi)ABCA1蛋白含量，實(shí)時(shí)定量PCR檢測ABCA1 mRNA水平。分別用miR-33a模擬肽（miR-33a mimic）和anti-miR-33a轉(zhuǎn)染THP-1細(xì)胞對LPS作用下的細(xì)胞處理24h,再加入 vaspin處
3、理24h，檢測細(xì)胞內(nèi) ABCA1、miR-33a和SREBP mRNA表達(dá)水平。用NF-κB抑制劑預(yù)處理LPS作用下的THP-1細(xì)胞24h，再加或不加vaspin處理，檢測細(xì)胞內(nèi)NF-κB p65蛋白、ABCA1蛋白和mRNA表達(dá)、miR-33a mRNA表達(dá)、細(xì)胞膽固醇的流出情況。
結(jié)果：Vaspin上調(diào)THP-1巨噬細(xì)胞ABCA1蛋白及mRNA水平呈時(shí)間和劑量依賴性。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)vaspin可以抑制miR-33amRNA
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