苯并芘通過(guò)NF-κB誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞MMPs的表達(dá).pdf

1、目的:研究香煙煙霧的重要組成成分苯并[a]芘(BaP)對(duì)巨噬細(xì)胞的作用，并探討其機(jī)制。
　　方法:第一部分:將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的RAW264.7單核巨噬細(xì)胞接種于6孔板，隨機(jī)分為四組:①正常對(duì)照組:不做任何處理;②溶劑對(duì)照組（即DMSO組）:DMSO終濃度為0.1ml/L。③BaP組:BaP終濃度為20umol/L。④PDTC組:PDTC為核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的抑制因子二硫代氨基甲酸吡咯烷。先使用50umol/L的PDTC作用細(xì)胞2小時(shí)

2、后，再用20umol/L的BaP作用細(xì)胞24小時(shí)。提取各組總蛋白及核蛋白，各組實(shí)驗(yàn)最少重復(fù)三次。利用Western Blotting檢測(cè)各組NF-κB、MMP2、MMP9、MMP12蛋白的表達(dá)情況。CCK8法檢測(cè)RAW264.7細(xì)胞的增殖能力，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。第二部分:利用免疫組化技術(shù)檢測(cè)人髂總動(dòng)脈瘤中RAGE的表達(dá)量;在老齡C57/B6J小鼠BaP誘導(dǎo)的AAA的組織切片中，采用免疫組化技術(shù)觀察RAGE是否表達(dá)。將RAW

3、264.7單核巨噬細(xì)胞隨機(jī)分為四組，分組方法與第一部分相同，培養(yǎng)24小時(shí)后提取總蛋白，采用Western Blotting法檢測(cè)各組RAGE的表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　1.Western Blotting檢測(cè)MMP9和MMP12。與正常組比較，溶劑組指標(biāo)表達(dá)未見(jiàn)明顯變化，P＞0.05; BaP組兩個(gè)指標(biāo)表達(dá)均顯著升高，P值均小于0.05。與BaP組相比，PDTC組兩個(gè)指標(biāo)表達(dá)顯著下降，P值均小于0.05。
　　2.We

4、stern Blotting檢測(cè)MMP2表達(dá)。與正常組比較，溶劑組、BaP組的MMP2表達(dá)無(wú)顯著性差異，P＞0.05。與BaP組相比，PDTC組的MMP2的表達(dá)無(wú)顯著性差異，P＞0.05。
　　3.Western Blotting檢測(cè)NF-κB中P65的表達(dá)。總蛋白中的P65各組間表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。核蛋白的檢測(cè)中，與正常組相比，溶劑組無(wú)顯著性差異;BaP組P65表達(dá)顯著升高，P＜0.05。與BaP組相比，PDTC組的

5、核P65表達(dá)顯著下降，P＜0.05。
　　4.人的髂總動(dòng)脈瘤中可見(jiàn)RAGE表達(dá)明顯，而在人的正常的動(dòng)脈組織中未觀察到RAGE表達(dá);
　　5.在老齡C57/B6J小鼠BaP誘導(dǎo)的AAA模型中，在動(dòng)脈瘤組織中未見(jiàn)RAGE表達(dá);在老齡C57/B6J小鼠的正常腹主動(dòng)脈中，未觀察到RAGE的表達(dá)。
　　6.Western Blotting檢測(cè)RAGE的表達(dá)。與正常組相比，BaP組的RAGE表達(dá)可見(jiàn)升高，但統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)意義，P大于0.