氧化低密度脂蛋白對(duì)THP-1源巨噬細(xì)胞凋亡的影響及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機(jī)制的相關(guān)研究.pdf

1、第一部分不同濃度氧化低密度脂蛋白對(duì)THP-1源巨噬細(xì)胞凋亡的影響
　　 目的：探討氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)對(duì)培養(yǎng)的人單核巨噬細(xì)胞THP-1細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法：體外培養(yǎng)的人THP-1單核細(xì)胞經(jīng)氟波酯（PMA）誘導(dǎo)48小時(shí)，使形成巨噬細(xì)胞，將分化良好的巨噬細(xì)胞分別用不同濃度ox-LDL(0～100μg/ml)培養(yǎng)48 h和用75μg/ml ox-LDL培養(yǎng)THP-1細(xì)胞不同時(shí)間(0～72h),應(yīng)用Annex

2、in-V和碘化丙錠雙染色后,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，觀察不同濃度ox-LDL對(duì)細(xì)胞凋亡率的影響。實(shí)驗(yàn)分為以下3組：空白對(duì)照組、nLDL組、ox-LDL組（分不同濃度，不同時(shí)間）。實(shí)驗(yàn)終止后，通過流式細(xì)胞儀來檢測(cè)巨噬細(xì)胞的凋亡率。
　　 結(jié)果：與空白組及內(nèi)對(duì)照組相比，ox-LDL處理后的細(xì)胞調(diào)亡率增加,并且呈時(shí)間和劑量依賴性,隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)和濃度的增加,凋亡呈遞增變化。
　　 結(jié)論：ox-LDL可以誘導(dǎo)THP-1源巨

3、噬細(xì)胞凋亡,并且呈時(shí)間和劑量依賴性。
　　 第二部分 氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)THP-1源巨噬細(xì)胞凋亡的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機(jī)制的相關(guān)研究
　　 目的：探討氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導(dǎo)人單核巨噬細(xì)胞THP-1細(xì)胞凋亡的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機(jī)制，同時(shí)選擇P38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，使用P38MAPK的特異性抑制劑SB203580觀察ox-LDL的作用變化，進(jìn)一步分析ox-LDL是否通P38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的機(jī)制。

4、　　 方法:將分化良好巨噬細(xì)胞用100μg/ml的ox-LDL 培養(yǎng)48 h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為3組：空白對(duì)照組、ox-LDL組、ox-LDL+SB203580組(p38 MAPK抑制劑)（5 μmol/L)。實(shí)驗(yàn)終止后，用RT-PCR和Western-blot法測(cè)定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激指標(biāo)GRP78、 Caspase-12、CHOP及p38MAPK的表達(dá)。
　　 結(jié)果：空白對(duì)照組中無GRP78、 Caspase-12、CHOP及p38

5、MAPK蛋白和mRNA的表達(dá)，單純ox-LDL組和ox-LDL+SB203580組中GRP78、 Caspase-12、CHOP及p38MAPK蛋白和mRNA的表達(dá)均增加，具有顯著性差異（p＜0.05），而ox-LDL+SB203580組和單純ox-LDL組相比，以上mRNA和蛋白的表達(dá)有所減少（p＜0.05）。
　　 結(jié)論：1. Ox-LDL可以誘導(dǎo)THP-1源巨噬細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)2.P38MAPK通道抑制劑SB20358