糖基化終產物促進氧化型低密度脂蛋白誘導的巨噬細胞泡沫化與內質網應激.pdf

1、目的:觀察羧甲基賴氨酸(Carboxymethyl-lysine，CML)對荷脂巨噬細胞脂質調節(jié)轉運子的影響及干預巨噬細胞內質網應激發(fā)生的作用，探討糖基化終產物致動脈粥樣硬化發(fā)生的相關機制。
　　方法:使用4-6代RAW264.7細胞株，巨噬細胞復蘇后進行連續(xù)培養(yǎng)，根據干預條件不同分為對照組、oxLDL組，CML+ oxLDL混合干預組。分別用不同濃度CML和氧化型低密度脂蛋白孵育細胞48小時后，用油紅O染色鑒定泡沫細胞形成，膽固

2、醇檢測試劑盒檢測各組細胞中游離膽固醇(FC)、膽固醇酯(CE)、總膽固醇(TC)濃度來選擇能誘導巨噬細胞源性泡沫化的最佳濃度。利用流式細胞學技術檢測各組細胞氧化型低密度脂蛋白受體CD36和三磷酸結合盒轉運子ABCA1表達量的變化;實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應檢測定各組內質網應激分子C/EBP同源蛋白(CHOP)、PKR樣內質網激酶(PERK)的表達量。
　　結果:油紅染色顯示小鼠巨噬細胞源性泡沫細胞誘導成功，膽固醇試劑盒檢測顯示

3、50μg/mL oxLDL+10μM CML可誘導RAW264.7細胞最大泡沫化。糖基化終產物影響膽固醇逆轉運，與對照組和oxLDL單獨干預組相比，oxLDL+CML共處理巨噬細胞組中CD36的表達顯著升高(P＜0.05)，同時三磷酸腺苷結合盒轉運子ABCA1的表達量顯著降低(P＜0.05）。oxLDL+ CML共處理RAW264.7細胞較oxLDL單獨干預組顯著上調內質網應激標志分子CHOP、PERK的表達(P＜0.05)。