氧化性低密度脂蛋白對(duì)破骨細(xì)胞增殖及分化的影響.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩42頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、背景:
  動(dòng)脈粥樣硬化(atheromsclerosis,AS)是心腦血管系統(tǒng)疾病中最為常見(jiàn)也最為重要的一種,其臨床特點(diǎn)一般表現(xiàn)為動(dòng)脈內(nèi)膜的脂質(zhì)沉積,進(jìn)而導(dǎo)致斑塊形成,纖維組織增生和鈣鹽的沉積,最終導(dǎo)致動(dòng)脈的管壁變硬、管腔狹窄,并引起一系列繼發(fā)性病變。臨床研究顯示,ox-LDL在整個(gè)動(dòng)脈粥樣硬化(AS)形成和發(fā)展過(guò)程中起了重要作用。ox-LDL是血漿中LDL經(jīng)動(dòng)脈壁細(xì)胞氧化后產(chǎn)生多種活性醛類,再與LDL載脂蛋白(apoB)中賴氨

2、酸殘基結(jié)合形成的產(chǎn)物,可被巨噬細(xì)胞的清道夫受體識(shí)別而快速攝取,促進(jìn)巨噬細(xì)胞形成泡沫細(xì)胞,從而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化(AS)的發(fā)生。
  骨質(zhì)疏松癥(Osteoporosis,OP)是一種以骨量減少、骨微觀結(jié)構(gòu)退化為特征,致使骨脆性增加并易于發(fā)生骨折的一種全身性骨骼疾病。有學(xué)者認(rèn)為成骨細(xì)胞(Osteoblast,OB)的退變,造成骨形成最佳條件缺陷,最終使骨組織結(jié)構(gòu)及力學(xué)特征改變,從而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥。還有學(xué)者證實(shí)通過(guò)測(cè)定骨形成和骨吸收表面

3、,認(rèn)為骨質(zhì)疏松癥成骨過(guò)程正常,而破骨活動(dòng)顯著活躍。無(wú)論哪種情況都說(shuō)明骨質(zhì)疏松癥是因?yàn)槌晒羌?xì)胞和破骨細(xì)胞之間的動(dòng)態(tài)平衡被打破,骨吸收遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)骨形成所導(dǎo)致的。破骨細(xì)胞(Osteoclast,OC)是人體生理性骨重建和病理性骨破壞過(guò)程中高度特異性且唯一具有骨質(zhì)吸收功能的多核巨細(xì)胞,其來(lái)源于骨髓單核巨噬細(xì)胞系。破骨細(xì)胞的活性改變是導(dǎo)致各種代謝性骨病的主要原因,也是研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)。有研究顯示老年婦女的骨量丟失比較嚴(yán)重的會(huì)同時(shí)表現(xiàn)出嚴(yán)重的腹主動(dòng)脈

4、及冠狀動(dòng)脈硬化;排除體重指數(shù)、年齡、激素、吸煙等因素后,美國(guó)墨西哥裔老年女性和男性頸動(dòng)脈IMT厚度及骨密度呈負(fù)相關(guān)性;老年男性O(shè)P組比非OP組頸動(dòng)脈硬化病變(粥樣斑塊、IMT增厚)的發(fā)生率明顯增高,并隨著AS的程度加重而更加明顯;非骨質(zhì)疏松組IMT比骨質(zhì)疏松組薄,隨著年齡的增加,頸動(dòng)脈IMT越來(lái)越厚,骨密度越來(lái)越低。山此可推測(cè)OP與AS具有相關(guān)性,它們之間可能存在著共同危險(xiǎn)因素。還有學(xué)者認(rèn)為OP與AS之間并無(wú)相關(guān)性。為了進(jìn)一步明確兩者之

5、間的關(guān)系,特進(jìn)行此研究。
  目的:
  研究氧化性低密度脂蛋白(Ox-LDL)對(duì)破骨細(xì)胞增殖及分化的影響,為進(jìn)一步研究動(dòng)脈粥樣硬化和骨質(zhì)疏松癥之間的關(guān)系提供理論依據(jù)。
  方法:
  1.離心后收集健康人血漿,通過(guò)密度梯度離心法制得LDL提取液,氧化、調(diào)整蛋白濃度為50mg/L。通過(guò)銅氧化法制得氧化性低密度脂蛋白。通過(guò)測(cè)定TBA(硫代巴比妥酸)反應(yīng)物質(zhì)的含量(MDA藥盒)鑒定其氧化修飾程度。
  2.將R

6、aw264.7細(xì)胞株復(fù)蘇后,用RPMI-1640培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),視細(xì)胞生長(zhǎng)情況進(jìn)行傳代、凍存等。待細(xì)胞培養(yǎng)至所需細(xì)胞數(shù)量后,更換含RANKL的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),分別進(jìn)行觀察和鑒定:(1)直接用倒置相差顯微鏡觀察活細(xì)胞的形態(tài)和數(shù)量的變化(2)參照TRAP染色試劑盒說(shuō)明書對(duì)誘導(dǎo)前后細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行觀察,光鏡下計(jì)算TRAP陽(yáng)性破骨細(xì)胞總數(shù),細(xì)胞數(shù)大于等于3個(gè)為TRAP(+),染色陽(yáng)性細(xì)胞為破骨細(xì)胞。MTT法測(cè)定其對(duì)破骨細(xì)胞增殖及分化能力的影響。

7、r>  結(jié)果:
 ?、俦咏Y(jié)構(gòu)濃度測(cè)定結(jié)果:LDL的測(cè)得值是1.20±0.41 umol/g蛋白,Ox-LDL的測(cè)得值是20.58+0.65umol/g蛋白。②倒置相差顯微鏡觀察Raw264.7細(xì)胞的一般特點(diǎn),細(xì)胞形態(tài)呈圓形、橢圓形、梭形、星形或不規(guī)則形,圓形為主。細(xì)胞核1-2個(gè),單個(gè)核多見(jiàn)。具有很強(qiáng)的貼壁性,胰酶-EDTA難以消化,常聚集生長(zhǎng)。隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)細(xì)胞體積逐漸增大,細(xì)胞形態(tài)以不規(guī)則形多見(jiàn),圓形少見(jiàn),細(xì)胞核為多個(gè)。T

8、RAP染色陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞質(zhì)鮮紅色或者淡紅色,細(xì)胞核2-3個(gè)多見(jiàn),形態(tài)呈多突起不規(guī)則形。③不同濃度氧化性低密度脂蛋白干預(yù)破骨細(xì)胞后MTT法檢測(cè)說(shuō)明:氧化性低密度脂蛋白(Ox-LDL)可促進(jìn)破骨細(xì)胞的增殖及分化,其對(duì)破骨細(xì)胞的促進(jìn)作用在一定濃度范圍內(nèi)具有濃度依賴性:不同濃度的Ox-LDL對(duì)破骨細(xì)胞的增殖及分化的影響有差別:Ox-LDL濃度分別為100 mg/L,150 mg/L,200 mg/L時(shí),破骨細(xì)胞抑制率分別為0.65±0.732,

9、0.48±0.068,0.31±0.039,均低于對(duì)照組(1.28±0.147,P<0.05)。而Ox-LDL濃度為25 mg/L及50mg/L時(shí),破骨細(xì)胞抑制率分別為1.134±0.120和1.189±0.112,較對(duì)照組無(wú)顯著差別。
  結(jié)論:
  不同濃度的Ox-LDL作用于破骨細(xì)胞產(chǎn)生的增殖及分化作用是不同的;
  相同的作用時(shí)間下,低濃度的Ox-LDL對(duì)破骨細(xì)胞的增殖及分化無(wú)顯變化,在一定范圍內(nèi)隨著Ox-LD

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論