VEGF信號系統(tǒng)對肺單核細胞炎性細胞因子分泌的影響.pdf

1、[目的]:研究血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）對肺單核細胞炎性相關細胞因子的調(diào)控作用以及調(diào)控機制；研究通過阻斷血管內(nèi)皮生長因子受體1（VEGF-R1）是否能夠改變肺炎性反應（LIR）進程，減輕急性肺損傷（ALI）。
　　[方法]：1.健康SD雄性大鼠3％戊巴比妥麻醉后提取肺泡灌洗液中單核細胞，細胞免疫熒光染色F4/80,激光共聚焦觀察單核細胞。同樣方法細胞培養(yǎng)2h后，按不同的處理方式將細胞隨機分為6組（每組n=10）：N組（none）

2、，LPS組（脂多糖LPS100ug/ml），0.05V組(VEGF0.05ng/ml），5V組(VEGF5ng/ml），LPS+0.05V組（LPS100ug/ml+VEGF0.05ng/ml），LPS+5V組（LPS100ug/ml+VEGF5ng/ml），處理24小時后，取上清液 ELISA測定 TNF-α；取細胞測定 IL-6/IL-8/TNF-α/IL-4/IL-10/VEGF-R1 mRNA表達；取細胞Western Blot

3、測定VEGF-R1的表達。同樣方法提取單核細胞，培養(yǎng)后將細胞隨機分為3組：N（none）組，LPS組（100ug/ml），TNF-a組（500ug/ml），細胞免疫熒光染色 VEGF-R1，激光共聚焦觀察VEGF-R1的表達以及確定單核細胞被激活。2.健康SPF級C57雄性小鼠3%戊巴比妥麻醉后提取肺泡灌洗液中單核細胞，細胞培養(yǎng)2h后，按不同的處理方式將細胞隨機分為6組（每組n=12）：N組（none），LPS組（LPS100ug/ml

4、），VEGF組（VEGF5ng/ml），Blockade組（VEGF-R1 Blocker8ug/ml），LPS+Blockade組（LPS100ug/ml+ VEGF-R1 Blocker8ug/ml），LPS+ Blockade+VEGF組（LPS100ug/ml+ VEGF-R1 Blocker8ug/ml+ VEGF5ng/ml），處理24小時后，取細胞測定IL-6/TNF-a/IL-4/IL-10 mRNA表達。
　　[

5、結果]:(1)大鼠肺單核細胞染色：確定了單核細胞的純化。（2）不同濃度VEGF刺激大鼠肺單核細胞分泌炎性細胞因子mRNA的含量:LPS組與N組比較TNF-α，IL-6，IL-8，IL-10 mRNA的含量均顯著升高(P<0.001)； LPS+5V組的TNF-α mRNA含量明顯高于LPS組（P<0.05）；與LPS+0.05V組比較，LPS+5V組的TNF-αmRNA含量明顯升高(P<0.05)；與LPS組比較，LPS+5V組IL-1

6、0/TNF-α比率降低（P<0.05）；與LPS+0.05V組比較，LPS+5V組IL-10/TNF-α比率也降低（P<0.05）。與N組比較，其余各組IL-10/IL-6比率均降低（P<0.05）；與LPS組比較，LPS+5V組IL-10/IL-6比率降低（P<0.05）；與LPS+0.05V組比較，LPS+5V組IL-10/IL-6比率同樣也降低（P<0.05）。（3）不同濃度VEGF刺激大鼠肺泡灌洗液炎性細胞因子TNF-α的含量（

7、pg/ml）：與N組、0.05V組、5V組分別比較，LPS組的TNF-α含量（pg/ml）均顯著升高(P<0.05)。（4）不同刺激下肺單核細胞VEGF-R1的表達：大鼠肺單核細胞表面豐富表達VEGF-R1。當LPS刺激時，肺單核細胞被激活，胞體呈梭形或橢圓形，胞膜不規(guī)則，邊緣有毛刺，毛刺呈放射狀緊緊貼壁，胞漿有空泡，胞核形態(tài)不一，LPS能夠導致VEGF-R1顯著上調(diào)。（5）大鼠肺單核細胞VEGF-R1蛋白的表達：LPS組和N組比較，V

8、EGF-R1的蛋白表達增加，VEGF-R1光密度/GAPDH升高（P<0.05）。（6）大鼠肺單核細胞 VEGF-R1與 TNF-α表達的關系：VEGF-R1與TNF-α呈正相關，而VEGF-R1與IL-4呈負相關，VEGF-R1與IL-10也呈負相關。（7）阻斷VEGF-R1后小鼠肺單核細胞分泌炎性細胞因子mRNA的含量：與N組比較，LPS組TNF-αmRNA的表達明顯升高（P<0.05）；LPS+Block組TNF-αmRNA的表達

9、與LPS組比較，明顯降低（P<0.05）；LPS+Block+V組與LPS+Block組比較，TNF-αmRNA的表達又進一步升高（P<0.001）；LPS組與N組比較IL-6 mRNA的表達明顯升高（P<0.05）；LPS+Block+V組與LPS+Block組比較，IL-6 mRNA的表達又進一步升高（P<0.05）。LPS組與N組比較，IL-10/TNF-α比率明顯降低（P<0.05）；LPS+Block組與LPS組比較，IL-1