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1、目的:在β-葡聚糖作用下的骨髓單核細(xì)胞能夠促進(jìn)血管原性生長(zhǎng)因子的分泌以及內(nèi)在的可能機(jī)制。 方法:從280克-320克六只雄性Lewis大鼠中提取脛骨及股骨的骨髓細(xì)胞,經(jīng)過(guò)一系列的密度梯度離心及白細(xì)胞裂解而得到骨髓單核細(xì)胞。以RPMI-1640和1%的胎兒牛血清作為培養(yǎng)基,向裝有骨髓單核細(xì)胞的24孔細(xì)胞培養(yǎng)板(1x10<'7>cells/well)中加入β-葡聚糖(10uag/ml、100ug/ml)或不加入β-葡聚糖,分別在正常
2、氧分壓(95%O<,2>/5%CO<,2>)和低氧分壓(1%O<,2>/5%CO<,2>)下,37℃溫箱內(nèi)孵育。孵育22個(gè)小時(shí)后,用不含血清的RPMI液進(jìn)行2次培養(yǎng)基上清液的清洗以去除非貼壁細(xì)胞,而貼壁細(xì)胞在RPMI-1640和1%的胎兒牛血清作為培養(yǎng)液的條件下,在正常氧分壓的溫箱內(nèi)繼續(xù)孵育48小時(shí)。用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的水平。以含有不同濃度上清的細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮
3、細(xì)胞,分析骨髓單核細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響。從培養(yǎng)的骨髓單核細(xì)胞中提取RNA進(jìn)行RT-PCR分析。 結(jié)果:ELISA結(jié)果顯示,正常氧分壓和低氧分壓時(shí),無(wú)β-葡聚糖作用的骨髓單核細(xì)胞分泌的VEGF蛋白水平明顯低于低濃度β-葡聚糖組分泌的水平,兩者比較差異顯著;無(wú)β-葡聚糖作用的骨髓單核細(xì)胞在低氧分壓時(shí)分泌的VEGF蛋白水平明顯高于正常氧分壓時(shí)分泌的水平,兩者比較差異顯著;在本實(shí)驗(yàn)所采用的β-葡聚糖濃度范圍內(nèi),隨著β-
4、葡聚糖濃度的升高,VEGF蛋白分泌水平并不增高。RT-PCR分析表明,低氧分壓時(shí),低濃度β-葡聚糖組VEGF mRNA表達(dá)水平明顯高于無(wú)β-葡聚糖組。MTT結(jié)果顯示,低氧分壓時(shí),隨著骨髓單核細(xì)胞培養(yǎng)上清液濃度的增高,低濃度β-葡聚糖作用的骨髓單核細(xì)胞上清液和高濃度β-葡聚糖作用的骨髓單核細(xì)胞上清液MTT比色光密度值都增高,且分別高于無(wú)β-葡聚糖組,兩者比較差異顯著。 結(jié)論:首次研究了β-葡聚糖對(duì)骨髓單核細(xì)胞分泌血管原性生長(zhǎng)因子的
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