益氣解表法調(diào)控TLR4-NFκB信號(hào)通路影響B(tài)D-2表達(dá)機(jī)制的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：探索益氣解表法代表方參蘇飲調(diào)控TLR4-NFκB信號(hào)通路影響β-防御素-2表達(dá)的機(jī)制以及與解表法的相關(guān)性。
　　方法：1.選擇雄性SD大鼠，灌胃給予參蘇飲及其拆方藥液，心臟采血制備含藥血清；
　　2.傳代培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞（16HBE）；
　　3.LPS（1mg/L）刺激16HBE后不同時(shí)間點(diǎn)（3h、6h、12h、24h）測(cè)定細(xì)胞增殖活性及培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-8含量，建立16HBE炎癥模型；
　

2、　4.給藥前用PDTC預(yù)處理30min，采用RT-PCR法檢測(cè)給藥后不同時(shí)間點(diǎn)（0.5h、1h、3h、5h、8h）細(xì)胞hBD-2mRNA的表達(dá)情況；
　　5.給藥前用Anti-HumanTLR4預(yù)處理1h，采用RT-PCR法檢測(cè)給藥后不同時(shí)間點(diǎn)（0.5h、1h、3h、5h、8h）細(xì)胞NFκBp65mRNA、hBD-2mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.成功培養(yǎng)了人支氣管上皮細(xì)胞（16HBE）16HBE細(xì)胞為多邊形，形態(tài)不規(guī)則

3、，呈鋪路石樣單層貼壁生長(zhǎng)；一般3～5天傳代一次，3～4h開(kāi)始貼壁，進(jìn)而出現(xiàn)分裂相，分裂呈團(tuán)簇狀并逐漸拉網(wǎng)連接成片。
　　2.成功建立了16HBE炎癥模型LPS（1mg/L）刺激細(xì)胞12h時(shí)，細(xì)胞增殖較快且上清液中IL-8及TNF-α含量較正常對(duì)照組均有顯著性差異（P<0.01）。
　　3.NFκB在參蘇飲誘導(dǎo)炎癥16HBE表達(dá)hBD-2mRNA中的作用PDTC阻斷NFκB后，與模型組比較，全方組、益氣解表組hBD-2mRNA

4、相對(duì)表達(dá)量?jī)H在1h顯著性升高（P<0.05）；其余均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　4.TLR4在參蘇飲誘導(dǎo)炎癥16HBE表達(dá)hBD-2mRNA中的作用
　　Anti-HumanCD284阻斷TLR4后，與模型組比較：全方組NFκBp65mRNA、hBD-2mRNA相對(duì)表達(dá)量?jī)H在5h顯著性升高（P<0.05）；益氣解表組NFκBp65mRNA、hBD-2mRNA相對(duì)表達(dá)量?jī)H在3h顯著性升高（P<0.05）；其余均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)