TLR2和TLR4的表達(dá)與自然流產(chǎn)的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：流產(chǎn)(Abortion)是指懷孕未滿28周、胎兒體重未滿1000g而使懷孕受到終止，早期流產(chǎn)是指發(fā)生在懷孕12周以前者，晚期流產(chǎn)是指發(fā)生在滿12周及其之后者。自然流產(chǎn)是早孕期間比較多見(jiàn)的病癥，其發(fā)病原因和機(jī)制十分繁雜，除去常見(jiàn)的解剖結(jié)構(gòu)異常（如子宮畸形、宮頸功能不全等）、染色體異常、遺傳、內(nèi)分泌、理化環(huán)境及感染等因素外，近年來(lái)生殖免疫成為研究熱點(diǎn)之一，也有相關(guān)研究表明了免疫因素與自然流產(chǎn)密切相關(guān)。該理論認(rèn)為，從免疫移植學(xué)角度而言，

2、之所以懷孕期間孕囊作為帶有“外來(lái)”抗原的同種異體移植物可以存在于母親體內(nèi)，是因?yàn)槟阁w胎兒面免疫系統(tǒng)的精細(xì)和復(fù)雜的調(diào)節(jié)。很多因素可以經(jīng)過(guò)活化母親體內(nèi)Toll樣受體（Toll like receptors,TLRs），改變母體胎兒面多種活性因子的分布水平，破壞了母體胎兒面的免疫均衡，使得孕囊被母親體內(nèi)的免疫反應(yīng)所排斥，引發(fā)流產(chǎn)。TLRs是一類能辨識(shí)病原微生物的模式分子，有調(diào)控天然免疫和獲得性免疫的作用，并且參與母體胎兒面的抗病原微生物的天然

3、免疫應(yīng)答，TLRs既表達(dá)在免疫活性細(xì)胞，也在其他部位表達(dá)，如絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞、蛻膜組織等，在維系健康妊娠和自然流產(chǎn)發(fā)病中起到不可忽視的作用。目前關(guān)于與妊娠流產(chǎn)的相關(guān)TLRs中，對(duì)Toll樣受體2和4的研究相對(duì)較多，它們是體內(nèi)非常關(guān)鍵的自然免疫蛋白，也是TLRs家族亞類特征性的兩個(gè)，在大部分細(xì)胞系的細(xì)胞膜上都有分布，骨髓中單核細(xì)胞分布最多，在中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等細(xì)胞膜上也分布較多，另外，還分布于心肌細(xì)胞、微血管內(nèi)皮細(xì)胞、氣道上皮

4、細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、消化道上皮細(xì)胞、人胚胎腎細(xì)胞、齒齦纖維母細(xì)胞、人表皮和臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞以及胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞[1]。Toll樣受體2辨識(shí)肽聚糖，Toll樣受體4辨識(shí)脂多糖、內(nèi)毒素等，經(jīng)過(guò)髓樣分化蛋白88(MyD88)依賴性和非依賴性反應(yīng)轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑引起母體胎兒面的免疫活性因子Th1/Th2失去平衡。Th1分泌的趨化因子產(chǎn)生過(guò)多，對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用而形成免疫損傷，直接或間接影響孕囊的著床和成長(zhǎng)發(fā)育，而Th2則起到了維持母體胎兒面的免疫保護(hù)作

5、用。故而，當(dāng)Th1/Th2偏向Th1時(shí)發(fā)生病理性懷孕的風(fēng)險(xiǎn)增加。如果對(duì)自然流產(chǎn)的患者盲目給予保胎，而不是對(duì)因治療，往往達(dá)不到醫(yī)生和患者所期待的效果。因此盡最大可能進(jìn)行分析和尋找病因變的重要之至。文章就Toll樣受體2和4在絨毛和外周血中的分布情況與自然流產(chǎn)的相關(guān)性進(jìn)行探索。
　　方法：選擇2014年06月-2014年12月在解放軍第105醫(yī)院婦產(chǎn)科門診患者（年齡<35歲、孕周<12周）作為本次實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象：本次懷孕結(jié)局為自然流產(chǎn)

6、者、因意外懷孕自愿行人流終止妊娠的健康的早孕婦女。
　　納入的研究對(duì)象均由?？漆t(yī)師對(duì)病史進(jìn)行問(wèn)詢，包括既往史、月經(jīng)史、婚育史、家族史等，并核實(shí)填寫項(xiàng)目是否真實(shí)、準(zhǔn)確。體格檢查包括：一般體格檢查：血壓、身高、體重、甲狀腺、乳腺等，及常規(guī)婦科檢查。所有對(duì)象均接受基礎(chǔ)性激素檢查、B超檢查、夫婦染色體檢查、有無(wú)急慢性傳染病、婦科炎癥及與懷孕相關(guān)聯(lián)的免疫抗體（如抗磷脂抗體、抗β2糖蛋白抗體、抗核抗體、抗甲狀腺抗體、狼瘡抗凝血因子等為陽(yáng)性者）

7、等輔助檢查，盡可能排除遺傳、染色體、解剖等相關(guān)因素。
　　本次懷孕結(jié)局為自然流產(chǎn)患者列為研究組；將曾有懷孕和生育史，本次因意外懷孕自愿行人流終止妊娠的健康孕婦列為對(duì)照組，每組各20例。
　　采用免疫組化法檢查每例患者絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞中Toll樣受體2和4的分布水平（每個(gè)樣本隨機(jī)抽選一張切片，以觀察絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞胞漿內(nèi)是否含有棕黃色顆粒為判斷標(biāo)準(zhǔn))。采用 SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理。用平均值加減標(biāo)準(zhǔn)差分析。若P<0.05，

8、則有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)TLR2和TLR4分別在外周血淋巴細(xì)胞群、單核細(xì)胞群和粒細(xì)胞群的分布比值進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：1、自然流產(chǎn)組與妊娠對(duì)照組之間的年齡、孕齡和孕次的差異等均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、TLR2和 TLR4在自然流產(chǎn)組和妊娠對(duì)照組的絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞均見(jiàn)分布，主要分布在合體滋養(yǎng)細(xì)胞的胞漿中。3、TLR2在自然流產(chǎn)組和妊娠對(duì)照組的絨毛、外周血中單核細(xì)胞群和粒細(xì)胞群的分布水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)， TLR2在自

9、然流產(chǎn)組和妊娠對(duì)照組的外周血中淋巴細(xì)胞群的分布水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。4、自然流產(chǎn)組和妊娠對(duì)照組相比，TLR4在兩組絨毛及外周血淋巴細(xì)胞群、單核細(xì)胞群和粒細(xì)胞群的分布水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：1.TLR2和TLR4在自然流產(chǎn)組和妊娠對(duì)照組絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞、外周血淋巴細(xì)胞群、單核細(xì)胞群和粒細(xì)胞群中都有表達(dá)。2.TLR2在自然流產(chǎn)組外周血中淋巴細(xì)胞群的表達(dá)明顯升高， TLR4在自然流產(chǎn)組絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞