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1、【目的】內(nèi)毒素(LPS)具有極強的生物活性,是革蘭陰性細菌外膜的主要成分.革蘭陰性桿菌敗血癥等嚴重內(nèi)毒素血癥極易并發(fā)急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)甚至多器官功能衰竭,死亡率高,是臨床常見和亟待解決的問題.目前尚無針對內(nèi)毒素的特效治療.內(nèi)毒素作用于中性粒細胞與單核巨噬細胞,誘導一系列抗炎和促炎癥細胞因子的產(chǎn)生,在內(nèi)毒素血癥致肺部炎癥反應中發(fā)揮重要作用.Toll樣受體4(TLR4)是內(nèi)毒素介導的細胞信號轉(zhuǎn)導的主要受體,TLR2也可能參與LP
2、S信號轉(zhuǎn)導.內(nèi)毒素耐受是預先注射小劑量或亞致死量LPS后,機體對大劑量或致死量LPS呈低反應甚至無反應的現(xiàn)象.已有的研究表明內(nèi)毒素耐受時,內(nèi)毒素血癥引起的全身反應減輕,血液中促炎癥細胞因子低表達.近年來有實驗表明以小劑量LPS預刺激小鼠巨噬細胞,在LPS再次刺激后,細胞表面TLR4表達下降.該實驗通過建立內(nèi)毒素血癥肺部炎癥反應和內(nèi)毒素耐受小鼠模型,動態(tài)觀察內(nèi)毒素耐受小鼠在內(nèi)毒素血癥時早期炎癥反應與正常小鼠的異同.同時動態(tài)觀察肺勻漿中腫瘤
3、壞死因子-α(TNF-α)和干擾素-γ(IFN-γ)的分泌,并觀察肺部TLR4 mRNA與TLR2 mRNA的表達情況,初步探索體內(nèi)內(nèi)毒素耐受可能的機制.【方法】(1)內(nèi)毒素耐受和內(nèi)毒素血癥肺部炎癥反應模型的建立:清潔級健康雄性BALB/c小鼠,體重20~25克,隨機分入內(nèi)毒素耐受(ET)組和正常對照(NC)組.ET組1mg/kg/d腹腔注射LPS,連續(xù)4天建立內(nèi)毒素耐受小鼠模型;NC組注射等量生理鹽水.第五天腹腔注射10 mg/kg
4、LPS誘導全身以及肺部炎癥反應.各組按注射大劑量LPS前(0小時),注射后2、6小時分為3組,n=5,在各時間點收集肺組織分別迅速置入4﹪甲醛和液氮,保存于-80℃待測.(2)另取24只小鼠,隨機分入2組,觀察至腹腔注射10mg/kg LPS后5天,在耐受誘導期間每日同一時間給藥前記錄體重,觀察飲食、活動等情況.至大劑量內(nèi)毒素腹腔注射后觀察小鼠生存情況.(3)由冰凍肺組織制備肺組織勻漿,采用ELISA方法測定肺勻漿中TNF-α與IFN-
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