TLR4和TLR2激動劑協(xié)同誘導(dǎo)SR-A受體表達(dá)及其在內(nèi)毒素耐受中的作用.pdf

1、小劑量的內(nèi)毒素預(yù)處理后的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞對LPS再次刺激的反應(yīng)性明顯降低，表現(xiàn)為炎癥因子的分泌減少；而且能提高小鼠在致死劑量內(nèi)毒素再次刺激后的存活率，即內(nèi)毒素耐受現(xiàn)象。自從證實(shí)TLR(Toll-likereceptor)4是LPS的信號受體以來，內(nèi)毒素耐受的研究主要集中于信號受體和TLR4胞內(nèi)信號分子的變化。基因敲除試驗證實(shí)SR-A(macrophagescavengerreceptorA)能通過調(diào)理素非依賴的方式吞噬細(xì)菌，從而提高小

2、鼠對病原體攻擊的抵抗能力，然而SR-A是否同樣參與內(nèi)毒素目前還不清楚。我們發(fā)現(xiàn)LPS能以劑量和時間依賴的方式誘導(dǎo)RAW264.7表達(dá)SR-A，這與RAW264.7對LPS的再次刺激后分泌的炎癥因子(TNF-α和IL-6)減少之間有著很好的相關(guān)性。過量表達(dá)或瞬時轉(zhuǎn)染SR-A能抑制LPS刺激RAW264.7分泌炎癥因子或活化NF-κB，說明LPS誘導(dǎo)上調(diào)的SR-A參與了內(nèi)毒素耐受。另外，LPS能增強(qiáng)RAW264.7對FITC-LPS的結(jié)合和

3、吞噬，但是能被清道夫受體SR配體Fucoidan和抗SR-A抗體2F8特異地抑制，提示RAW264.7結(jié)合和吞噬FITC-LPS的SR-A受體特異性。過量表達(dá)或瞬時轉(zhuǎn)染SR-A△1-49也同樣能抑制LPS刺激RAW264.7分泌炎癥因子或活化NF-κB，提示SR-A介導(dǎo)的RAW264.7對FITC-LPS的結(jié)合也能一定程度上抑制炎癥反應(yīng)。雖然，TLR4是LPS的信號受體，但是TLR4/MD-2抗體抑制TLR4信號后并不能抑制LPS誘導(dǎo)R

4、AW264.7表達(dá)SR-A。然而，p38特異性抑制劑SB203580卻能完全抑制LPS誘導(dǎo)RAW264.7表達(dá)SR-A。因此，p38，而不是TLR4，依賴的SR-A上調(diào)可能通過結(jié)合或吞噬LPS參與RAW264.7細(xì)胞內(nèi)毒素耐受的形成。 已知sLPS(來源于Sigma的EscherichiacoliO111：B4LPS)能誘導(dǎo)RAW264.7表達(dá)SR-A，但是許多商品化LPS，包括我們所用的sLPS，通常含有TLR4和TLR2兩種

5、激動劑，有關(guān)它們在誘導(dǎo)RAW264.7表達(dá)SR-A中的相對作用目前還不清楚。熒光素酶試驗證實(shí)我們所用的sLPS確實(shí)具有活化TLR4和TLR2兩種活性，但是重新純化去除TLR2激動劑或用多粘霉素(PmB)特異中和TLR4激動劑后的sLPS均只能微弱地誘導(dǎo)RAW264.7表達(dá)SR-A，但是等量的uLPS(re-extractedsLPS)和Pam3CSK4混合物卻能協(xié)同地誘導(dǎo)RAW264.7表達(dá)SR-A，而對TLR2和TLR4受體的表達(dá)沒有

6、協(xié)同作用。雖然，TLR2和TLR4激動劑能協(xié)同刺激RAW264.7分泌炎癥因子，但是細(xì)胞因子TNF-α、IL-6、IL-10或IL-12單獨(dú)與RAW264.7孵育均不能誘導(dǎo)SR-A的表達(dá)，TNF-α甚至能抑制uLPS和Pam3CSK4混合物誘導(dǎo)SR-A的表達(dá)。15μMNF-κB抑制劑PDTC只能微弱抑制uLPS和Pam3CSK4混合物誘導(dǎo)SR-A的表達(dá)，但是uLPS和Pam3CSK4混合物能促進(jìn)p38的磷酸化，而且10μM以上濃度的p3

7、8特異性抑制劑SB203580能完全抑制LPS誘導(dǎo)RAW264.7表達(dá)SR-A。另外，uLPS和Pam3CSK4混合物還能促進(jìn)RAW264.7結(jié)合和吞噬FITC-LPS，但是能被抗SR-A抗體2F8特異地抑制，提示RAW264.7結(jié)合和吞噬FITC-LPS的SR-A受體特異性。因此，我們的結(jié)果證明了TLR4激動劑和TLR2激動劑通過促進(jìn)p38的磷酸化協(xié)同誘導(dǎo)RAW264.7表達(dá)SR-A，促進(jìn)RAW264.7結(jié)合和吞噬LPS，從而負(fù)調(diào)炎癥