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文檔簡介
1、越來越多的證據(jù)顯示新生兒腦損傷常伴隨著感染和炎癥反應(yīng),但是其發(fā)病機制尚未完全闡明。Toll樣受體通過結(jié)合其特定的受體,激活抗原提呈細胞及特異性反應(yīng),作為橋梁連接先天性免疫和適應(yīng)性免疫,發(fā)揮重要的作用。其中,以TLR2可識別的配體最為廣泛,目前關(guān)于TLR2在成年鼠腦損傷中的作用研究很多,TLR2信號傳導(dǎo)通路激活對新生小鼠腦發(fā)育的影響尚不清楚。
研究目的:本研究將探討TLR2激動劑-Pam3CSK4對新生小鼠腦發(fā)育短期和長期的
2、影響。
材料與方法:C57BL/6新生小鼠被隨機分為三組,Pam3CSK4(5mg/kg)實驗組,內(nèi)毒素(LPS)陰性的生理鹽水組和LPS(0.3mg/kg)陽性對照組,各組小鼠于生后3日齡到11日齡每天腹腔注射各組處理藥物,分別于12日齡和53日齡處死并分別稱取腦、脾臟和肝臟。此外,首次腹腔注射各組實驗藥物6小時后,即3日齡時,取腦組織并采用ELISA方法檢測IL-1β、IL-6、KC、MCP-1和IL-10含量。灌注腦
3、組織經(jīng)石蠟固定后,切片后做免疫組化染色,分別使用MAP-2、MBP和NeuN免疫組化染色檢測TLR2激動劑Pam3CSK4對小鼠大腦灰質(zhì)、白質(zhì)以及海馬區(qū)神經(jīng)元的影響,并檢測炎癥(Iba-1)、增生(ki67)和凋亡(Caspase-3)指標。對小腦組織切片做組織染色后,評估其對小腦顆粒層、分子層和普肯野細胞的影響。在生后50同齡時通過驚嚇恐懼實驗來判斷其對小鼠記憶功能的影響,并進一步評估其長期效應(yīng)。此外,利用TLR2基因敲除小鼠來進一步
4、驗證TLR2對新生小鼠腦發(fā)育的影響。
結(jié)果:生后3日齡小鼠經(jīng)TLR2激動劑-Pam3CSK4腹腔注射9天后,小鼠大腦灰質(zhì)和白質(zhì)的體積減小,并且伴隨肝臟和脾臟的重量增加。此外,與陰性對照組相比,Pam3CSK4處理組小鼠海馬神經(jīng)元密度降低,同時小膠質(zhì)細胞密度顯著增加,但凋亡因子及細胞增生因子未發(fā)生明顯變化,其小腦分子層體積減少,而顆粒細胞層體積及浦肯野氏細胞密度未發(fā)生顯著變化。TLR2基因敲除小鼠沒有發(fā)現(xiàn)明顯大腦白質(zhì)和灰質(zhì)損
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