LPS對(duì)不同成熟度新生小鼠腦發(fā)育的影響及EPO的腦保護(hù)作用.pdf

1、背景和目的：圍生期感染可以導(dǎo)致早產(chǎn)及新生兒腦損傷,而且可以作為腦損傷獨(dú)立的危險(xiǎn)因素。近年來,人們已經(jīng)利用細(xì)菌內(nèi)毒素成分—脂多糖(LPS),成功建立由感染導(dǎo)致的新生動(dòng)物腦損傷模型,經(jīng)典的動(dòng)物模型之一系利用孕鼠制做宮內(nèi)感染,用來模擬產(chǎn)前感染對(duì)新生兒腦發(fā)育的影響,但比較生后感染對(duì)不同成熟度新生兒腦發(fā)育的影響及動(dòng)物模型卻較少見。本研究通過向不同日齡的新生小鼠腹腔內(nèi)注射一定劑量的LPS,制備能夠模擬臨床早產(chǎn)兒和近足月兒慢性感染的動(dòng)物模型,探討生后

2、感染對(duì)不同成熟度腦組織的損傷作用以及促紅細(xì)胞生成素(EPO)對(duì)感染所致腦損傷的腦保護(hù)作用,旨在為新生兒腦損傷的防治提供依據(jù)。
　　材料與方法：2日齡昆明清潔級(jí)新生小鼠隨機(jī)分為4組:0.3mg/kg LPS組、0.6mg/kg LPS組、0.9mg/kg LPS組、生理鹽水組,腹腔內(nèi)分別注射各組的處理藥物。每組中部分新生小鼠于第1次給藥后6h采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定腦組織中白介素-6(IL-6)水平;剩余小鼠連續(xù)腹腔給藥

3、5d,觀察體重變化、活動(dòng)情況以及病死率,在最后一次給藥后24h,稱取各組新生小鼠的肝臟,以確定能模擬臨床新生兒感染的LPS劑量。2日齡和7日齡的新生小鼠分別被隨機(jī)分為2組:感染組(0.6mg/kg的LPS)、對(duì)照組(等容積的生理鹽水),分別連續(xù)腹腔給藥5d,每天1次,繼續(xù)飼養(yǎng)至12日齡時(shí),免疫組化方法檢測(cè)腦組織中堿性髓鞘蛋白(MBP)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)的表達(dá)情況,用來觀察LPS對(duì)不同日齡新生小鼠腦白質(zhì)和灰質(zhì)的影響。2日齡新

4、生小鼠隨機(jī)分為3組:對(duì)照組(等容積的生理鹽水)、LPS組(0.6mg/kg的LPS)、 EPO干預(yù)組(0.6mg/kg LPS+5000U/kg EPO),分別連續(xù)腹腔給予相應(yīng)的藥物5天(給藥的同時(shí)腹腔注射50mg/kg的BrdU),最后1次用藥24h后,免疫組化方法檢測(cè)腦組織海馬齒狀回顆粒下層溴脫氧尿嘧啶(BrdU)和半胱氨酸天冬酶-3(Caspase-3)的表達(dá)情況,用來觀察EPO對(duì)感染所致腦損傷后細(xì)胞增生和凋亡的影響。
　　

5、結(jié)果：1.不同劑量的LPS對(duì)2日齡新生小鼠腦組織IL-6水平、一般情況、體重及相對(duì)肝重的影響不同劑量的LPS組,腦組織中IL-6水平較生理鹽水組均有升高。0.9mg/kgLPS組新生小鼠給藥后3天內(nèi)全部陸續(xù)死亡,其余三組新生小鼠未出現(xiàn)死亡。0.6mg/kg LPS組新生小鼠體重增長(zhǎng)緩慢,而0.3mg/kg LPS組體重增長(zhǎng)與生理鹽水組無(wú)明顯差異。相對(duì)肝重(肝重/體重)在不同劑量的LPS組均較生理鹽水組增加明顯(P＜0.05)。2.臨床感

6、染劑量的LPS對(duì)不同日齡新生小鼠大腦腦白質(zhì)和灰質(zhì)的影響2日齡感染組小鼠腦組織中MBP和NSE的平均積分光密度值分別為:125.36±0.13、108.65±0.32,較同日齡對(duì)照組(134.75±0.27、113.71±0.23)明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而7日齡感染組小鼠腦白質(zhì)MBP的表達(dá)(134.74±0.23)與同日齡對(duì)照組(134.76±0.28)比較無(wú)明顯差異,而腦灰質(zhì)NSE的表達(dá)(104.59±0.37)較

7、同日齡對(duì)照組(113.61±0.23)明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。3.EPO對(duì)感染所致腦損傷的保護(hù)作用對(duì)照組、LPS組、EPO干預(yù)組海馬齒狀回顆粒下層BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別為:24.6±1.17、8.4±1.35、12.8±0.79,三組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);三組的Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別為:21.0±1.70、34.0±1.25、27.9±1.45,三組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。