PPARγ激動(dòng)劑對(duì)肥胖小鼠腎組織AMPK的影響及其抗氧化應(yīng)激作用.pdf

1、目的：
　　肥胖越來越被認(rèn)為是腎臟疾病的主要危險(xiǎn)因素。我們之前的研究表明PPARγ激動(dòng)劑吡格列酮可通過升高單純肥胖小鼠血清脂聯(lián)素水平而起到腎臟保護(hù)作用，而有研究表明脂聯(lián)素有抗氧化應(yīng)激作用，但PPARγ激動(dòng)劑的腎臟保護(hù)作用是否與抗氧化應(yīng)激有關(guān)尚不清楚。本研究探討PPARγ激動(dòng)劑對(duì)單純肥胖小鼠腎組織AMPK的影響及其抗氧化應(yīng)激作用。
　　方法：
　　6周齡雄性ob/ob小鼠24只和其同系C57BL/6J小鼠8只,適應(yīng)性飼養(yǎng)

2、2周，測量體重并留尿測量24h尿微量白蛋白，確定ob/ob小鼠體重及24h尿微量白蛋白與C57BL/6J小鼠有顯著差異。按照體質(zhì)量分層抽樣，將ob/ob小鼠隨機(jī)分為3組：模型組（M組，n=8）、小劑量治療組（T1組，n=8）、大劑量治療組（T2組，n=8）；C57BL/6J小鼠作為對(duì)照組（C組，n-8）。治療組分別給予吡格列酮灌胃，其中 T1組為吡格列酮2.25mg·kg-1·d-1，T2組為吡格列酮
　　6.75mg·kg-1·

3、d-1，C組和M組小鼠給予等體積蒸餾水灌胃。每周稱量小鼠體重一次，根據(jù)體重調(diào)整給藥劑量，連續(xù)12周。灌胃前后分別采集血液標(biāo)本以測定小鼠血糖，血清ADP，并留尿液測定24小時(shí)尿mALB。12周后處死小鼠，摘取腎臟，稱量右腎濕重。光鏡下觀察小鼠腎臟病理改變，并測量腎小球直徑；免疫組化方法檢測腎組織內(nèi)AMPK及NOX-4的表達(dá)。比較四組小鼠各個(gè)指標(biāo)間的差異，并將血清ADP、24h尿微量白蛋白、腎組織AMPK及NOX4表達(dá)水平分別與其他指標(biāo)做相

4、關(guān)性分析。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1小鼠的一般情況
　　1.1實(shí)驗(yàn)前兩種小鼠體重及尿蛋白的比較：6周齡時(shí)ob/ob小鼠平均體質(zhì)量已明顯高于C57BL/6J小鼠（P<0.01）,適應(yīng)性飼養(yǎng)2周后，ob/ob小鼠體質(zhì)量不僅明顯高于C57BL/6J小鼠（P<0.01），且平均體重已經(jīng)超過后者的50％（>20%），即達(dá)到小鼠肥胖標(biāo)準(zhǔn)，ob/ob小

5、鼠尿微量白蛋白明顯高于C57BL/6J小鼠（P<0.01），雖然兩種小鼠血糖存在差異（P<0.05），但都尚未達(dá)到糖尿病標(biāo)準(zhǔn)，可排除因糖尿病導(dǎo)致的蛋白尿，確定ob/ob小鼠蛋白尿是由肥胖造成。
　　1.2各組小鼠實(shí)驗(yàn)前后體重：分組后M組和T1、T2組小鼠體質(zhì)量均超過C組小鼠平均體質(zhì)量的20%，即達(dá)到小鼠肥胖標(biāo)準(zhǔn)(P<0.01)，M組、T1組、T2組小鼠體質(zhì)量無顯著差異(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)M組和T1、T2組小鼠體質(zhì)量超過C組

6、小鼠更為明顯(P<0.01)，T2組較T1組小鼠體質(zhì)量高(P<0.01)。各組小鼠實(shí)驗(yàn)后體質(zhì)量均高于實(shí)驗(yàn)前(P<0.01)
　　2血清脂聯(lián)素濃度：
　　2.1各組前后比較：實(shí)驗(yàn)后M組和T1、T2組小鼠血清脂聯(lián)素水平均較實(shí)驗(yàn)前降低(P<0.01)，C組前后無明顯變化(P>0.05)。
　　2.2各組之間比較：實(shí)驗(yàn)前M組和T1、T2組小鼠血清ADP較C組降低(P<0.01)，實(shí)驗(yàn)后T1、T2組小鼠血清ADP高于M組(P<0

7、.01)，且T2組高于T1組(P<0.01)。
　　324h尿微量白蛋白：
　　3.1各組前后比較：實(shí)驗(yàn)后M組和T1、T2組小鼠24h尿微量白蛋白均較實(shí)驗(yàn)前增加(P<0.01)，C組前后無明顯變化(P>0.05)。
　　3.2各組之間比較：實(shí)驗(yàn)前后M組和T1、T2組小鼠24h尿微量白蛋白均明顯高于C組(P<0.01)；實(shí)驗(yàn)后T1、T2組小鼠24h尿微量白蛋白較M組明顯降低(P<0.01)，且T2組明顯低于T1組(P<0

8、.01)。
　　4腎臟病理改變：
　　4.1腎臟濕重（右腎）：實(shí)驗(yàn)后M組和T1、T2組小鼠腎臟濕重明顯高于C組(P<0.05)，T1組及T2組右腎濕重明顯小于M組(P<0.01)，T2組右腎濕重明顯小于T1組(P<0.01)。
　　4.2腎組織病理改變：M組小鼠腎小球鮑曼氏囊增寬，基底膜增厚，系膜細(xì)胞和系膜基質(zhì)增生，腎小球體積增大，部分伴有局灶節(jié)段性腎小球硬化，輕度腎小管萎縮和間質(zhì)纖維化。T1、T2組病變程度較M組減輕

9、。
　　4.3腎小球直徑：實(shí)驗(yàn)后M組和T1、T2組小鼠腎小球直徑明顯大于C組(P<0.05)，T1組及T2組腎小球直徑明顯小于M組(P<0.01)，T2組腎小球直徑明顯小于T1組(P<0.01)。
　　5腎組織AMPK表達(dá)：可見AMPK在腎小球、腎小管及腎間質(zhì)均有表達(dá)；M組和T1、T2組小鼠腎組織AMPK表達(dá)較C組明顯減少(P<0.01)，T1、T2組小鼠腎組織AMPK表達(dá)明顯高于M組(P<0.01)，T2組明顯高于T1組(

10、P<0.05)。
　　6腎組織NOX-4表達(dá)：可見NOX-4在腎小球、腎小管及腎間質(zhì)均有表達(dá)；M組和T1、T2組小鼠腎組織NOX-4表達(dá)明顯高于C組(P<0.01)，T1、T2組小鼠腎組織NOX-4表達(dá)明顯低于M組(P<0.01)，T2組明顯低于T1組(P<0.05)。
　　7直線相關(guān)分析：
　　7.1尿微量白蛋白與體質(zhì)量、腎小球直徑、右腎濕重及NOX-4表達(dá)水平呈正相關(guān)（r1=0.741；r2=0.936；r3=0.

11、877；r4=0.878，P<0.001），與血清ADP及AMPK表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（r5=-0.915；r6=-0.759，P<0.001）。
　　7.2小鼠血清脂聯(lián)素與體質(zhì)量、腎小球直徑、右腎濕重、尿微量白蛋白、NOX-4呈負(fù)相關(guān)（r7=-0.772；r8=-0.821；r5=-0.915；r9=-0.958，P<0.001），與AMPK表達(dá)水平呈正相關(guān)（r10=0.878，P<0.001）。
　　7.3腎組織AMPK表達(dá)

12、水平與體質(zhì)量、腎小球直徑、右腎濕重、尿微量白蛋白及腎組織NOX4表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（r11=-0.627；r12=-0.711；r13=-0.743；r6=-0.759；r14=-0.884，P<0.001），與血清脂聯(lián)素濃度呈正相關(guān)（r10=0.878，P<0.001）。
　　7.4腎組織NOX-4表達(dá)水平與體質(zhì)量、腎小球直徑、右腎濕重、尿微量白蛋白呈正相關(guān)（r15=0.671；r16=0.843；r17=0.794；r4=0.8

13、78，P<0.001），與血清脂聯(lián)素濃度及腎組織AMPK表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（r9=-0.958；r14=-0.884，
　　7.4腎組織NOX-4表達(dá)水平與體質(zhì)量、腎小球直徑、右腎濕重、尿微量白蛋白呈正相關(guān)（r15=0.671；r16=0.843；r17=0.794；r4=0.878，P<0.001），與血清脂聯(lián)素濃度及腎組織AMPK表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（r9=-0.958；r14=-0.884，2.PPARγ激動(dòng)劑吡格列酮可升高肥胖小