AMPK激動劑對神經病理性疼痛小鼠治療作用的研究.pdf

1、神經病理性疼痛(neuropathic pain, NP)是由神經系統(tǒng)損傷所引起的一種極難治療的慢性狀態(tài)，其機制復雜，常規(guī)鎮(zhèn)痛藥物無明顯療效。其特征主要表現(xiàn)為痛覺超敏、痛覺異常以及自發(fā)性疼痛。脊髓為疼痛傳導的初級中樞，本文主要研究在脊髓水平與神經病理性疼痛相關蛋白的變化，從而提出治療神經病理性疼痛的新方法。
　　AMPK(AMP-Activated Protein Kinase)一磷酸腺苷活化蛋白激酶，是調控能量代謝的重要內源性激

2、酶。這是疼痛領域發(fā)現(xiàn)的在藥理學上唯一一個通過激動劑起作用的激酶。目前認為AMPK激動劑可緩解外周神經損傷、調節(jié)切口誘導的疼痛可塑性以及阻斷手術后慢性疼痛的發(fā)展。
　　目的:
　?、沤⑸窠洸±硇蕴弁葱∈竽Ｐ?，為研究神經病理性疼痛提供一個良好的實驗基礎。
　?、朴^察二甲雙胍以及AICAR這兩種AMPK激動劑對神經病理性疼痛小鼠是否有治療作用，從而為使用二甲雙胍治療臨床神經病理性疼痛病人提供科學依據(jù)。
　　⑶觀察經

3、AMPK激動劑治療后的神經病理性疼痛小鼠脊髓及患側坐骨神經中AMPKα1和AMPKα2與治療前相比有沒有變化，并推測在治療神經病理性疼痛小鼠中起主要作用的AMPKα亞型。
　?、冗M一步觀察 AMPK激動劑治療后小鼠脊髓及患側坐骨神經中P-AMPKα與治療前相比有無變化，以探討AMPK的激活對治療神經病理性疼痛小鼠的作用。
　　方法:
　　⑴用成年雄性BALB/c小鼠建立SNI神經病理性疼痛模型，即結扎并切斷左側坐骨神經

4、的分支脛神經和腓總神經，保留腓腸神經。假手術組除不結扎神經外，其余同手術組。于術前及術后用von Frey纖毛測定小鼠左足機械痛閾，推算50％機械縮足閾值（50%MWT），凡術后7天50%MWT≥1.0 g，即認定建模失敗，排除在實驗之外。
　?、聘骨蛔⑸涠纂p胍或鞘內注射AICAR治療神經病理性疼痛小鼠。
　?、切∈笮呐K灌注后，分別提取L4-L6段脊髓及患側坐骨神經標本，提取標本中的RNA，用RT-qPCR測不同分組小鼠脊

5、髓及患側坐骨神經中AMPKα1和AMPKα2的mRNA表達量。
　?、刃∈笮呐K灌注后，取L4-L6段脊髓及患側坐骨神經，提取脊髓及坐骨神經中的蛋白，用western-blot方法測定蛋白中P-AMPKα和 AMPKα蛋白的表達量在不同分組小鼠中的變化。
　　結果:
　?、?SNI模型小鼠術后手術側足可見五趾并攏、足輕度外翻并產生自發(fā)性疼痛，存在痛覺過敏。SNI模型小鼠術后3天，手術側足機械痛閾明顯下降，有統(tǒng)計學意義（P

6、<0.05），證明神經病理性疼痛模型建立成功；至術后12天，機械痛閾下降達到峰值，持續(xù)至術后21天。
　?、朴枚纂p胍和AICAR治療后的神經病理性疼痛小鼠手術側機械痛閾相比于給藥前明顯升高（p<0.05），證明二甲雙胍和AICAR對SNI小鼠產生的痛敏有治療作用。
　?、怯蒖T-qPCR檢測得知各組小鼠之間脊髓和患側坐骨神經中AMPKα1和AMPKα2的表達量變化無統(tǒng)計學意義（p>0.05），但AMPKα2表達量多于AMP