p38MAPK在神經(jīng)病理性疼痛中作用的研究.pdf

1、背景：慢性疼痛中神經(jīng)病理性疼痛是最令醫(yī)生感到棘手的問(wèn)題，其發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，至今缺乏有效的治療措施。近十幾年來(lái)，人們致力于神經(jīng)病理性疼痛分子生物學(xué)研究，力求尋找到治療這類(lèi)頑疾的更有效的靶點(diǎn)。隨著研究的深入，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與神經(jīng)病理性疼痛的關(guān)系可能成為新的切入點(diǎn)：細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是細(xì)胞對(duì)外界刺激做出應(yīng)答反應(yīng)的基本生物學(xué)方式，眾多研究證實(shí)神經(jīng)病理性疼痛的形成與發(fā)展與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)多條通路密切相關(guān)。近年來(lái)越來(lái)越多的證據(jù)表明外周神經(jīng)損傷后，在神經(jīng)病

2、理性疼痛出現(xiàn)的同時(shí)，MAPK(絲裂原激活的蛋白激酶)通路的某些重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白活性也發(fā)生明顯變化，因此MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路成為研究焦點(diǎn)。p38MAPK是MAPK通路中的關(guān)鍵信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白之一，其變化很可能影響“疼痛信號(hào)”的傳遞，深入分析p38MAPK在神經(jīng)病理性疼痛中的作用，將有助于我們更好的理解信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在疼痛中的功能，以期發(fā)現(xiàn)更新更有效的疼痛治療靶分子。 目的：通過(guò)建立坐骨神經(jīng)結(jié)扎致神經(jīng)病理性疼痛模型(CCI)，采用行為學(xué)、免疫

3、組織化學(xué)和免疫蛋白印跡方法，觀察CCI術(shù)后脊髓背角和DRG中p38MAPK磷酸化水平(活性)的變化，并鞘內(nèi)注射p38MAPK特異性抑制劑SB203580觀察其鎮(zhèn)痛療效和對(duì)脊髓和背根神經(jīng)節(jié)TNFα分泌的影響，探討p38MAPK在神經(jīng)病理性疼痛中的作用。 第一部分神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角和背根神經(jīng)節(jié)p38MAPK活化水平的改變材料與方法：Sprague-Dawley大鼠80只，六周齡、雄性、體重160-200克。隨機(jī)分為3組，即正

4、常對(duì)照組(n=14)、假手術(shù)組(n=24，其中14只于術(shù)后3天處死取組織，剩下10只進(jìn)行痛閾測(cè)量)以及CCI組(n=42，其中CCI組又分為3、7、14天三個(gè)亞組，每組14只)。按Bennet和Xie等方法制作CCI模型，通過(guò)VonFreyfilament測(cè)定大鼠神經(jīng)結(jié)扎側(cè)(左側(cè))后足縮足反射閾值(MWT)。各組大鼠分別于術(shù)后3、7、14天處死，取脊髓和DRG，采用免疫組化和Westernblot方法測(cè)定脊髓背角和DRG中總p38MAP

5、K和磷酸化p38MAPK水平，并采用免疫熒光染色觀察脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞變化。 結(jié)論：1.外周神經(jīng)損傷后，脊髓背角和DRG中p38MAPK活化水平增加，MAPK通路被激活，可能參與神經(jīng)病理性疼痛的形成。 2.外周神經(jīng)損傷后，脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞被激活，預(yù)示其在神經(jīng)病理性疼痛中發(fā)揮重要作用。 第二部分p38MAPK抑制劑SB203580對(duì)神經(jīng)病理性疼痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用及其對(duì)脊髓和DRG分泌TNF-α的影響方法：S-D大鼠64只，

6、六周齡、雄性、體重160-200克。隨機(jī)分為4大組，包括對(duì)照組(n=8)、假手術(shù)組(n=8)、CCI+saline組(n=24，又分為3d、7d和14d三個(gè)亞組，每組8只)和CCI+SB組(n=24，又分為術(shù)前1天給藥組、術(shù)后1天給藥組和術(shù)后7天給藥組三個(gè)亞組，每組8只)。CCI+saline組大鼠鞘內(nèi)置管后給予生理鹽水治療，CCI+SB組大鼠鞘內(nèi)置管后分別于手術(shù)前后不同時(shí)間給予p38MAPK抑制劑——SB203580治療(兩次/天，每

7、次2μg/20μl，持續(xù)7天)。通過(guò)VonFreyfilament測(cè)定大鼠縮足反射閾值，觀察鎮(zhèn)痛效果。各組大鼠在相應(yīng)時(shí)間處死取脊髓和DRG，采用Westernblot方法測(cè)定脊髓背角和DRG中TNFα的含量變化。 結(jié)論：1.預(yù)先給予SB203580或術(shù)后立即給藥均可有效抑制疼痛，但是當(dāng)疼痛持續(xù)存在后再給予p38MAPK抑制劑則無(wú)明顯療效。 2.CCI術(shù)后鞘內(nèi)注射p38MAPK抑制劑——SB203580可以明顯緩解疼痛，因