QO-58lysine對神經(jīng)病理性疼痛模型大鼠的治療作用研究.pdf

1、神經(jīng)病理性疼痛是由于軀體感覺系統(tǒng)的損傷或疾病所導(dǎo)致的疼痛，臨床發(fā)病率較高，表現(xiàn)為持續(xù)性自發(fā)痛、痛覺超敏和痛覺過敏。神經(jīng)系統(tǒng)痛覺傳導(dǎo)通路興奮性增高常被認為是產(chǎn)生神經(jīng)病理性疼痛的基礎(chǔ)，包括外周敏化和中樞敏化，而神經(jīng)元自發(fā)異位電活動被認為是外周敏化的基礎(chǔ)之一。M通道在調(diào)節(jié)神經(jīng)興奮性方面發(fā)揮重要作用，它是一種閾電位附近激活的非失活的鉀電流，能抑制神經(jīng)元反復(fù)放電，穩(wěn)定膜電位，控制神經(jīng)元興奮性。開放M通道（KCNQ基因編碼，又稱Kv7通道）將引起細

2、胞膜超極化從而降低細胞神經(jīng)元興奮性，M通道開放劑可治療癲癇、焦慮、精神分裂癥和偏頭痛、神經(jīng)病理性疼痛、炎性痛等神經(jīng)興奮性相關(guān)的疾病。
　　QO-58lysine是經(jīng)過高通量篩選發(fā)現(xiàn)的一個具有自主知識產(chǎn)權(quán)的新化合物，作用靶點為Kv7/M通道。QO-58對Kv7.1-Kv7.5各亞基均有不同程度的開放作用，對Kv7.2/7.3的開放作用最強。前期對QO-58lysine的藥效學(xué)觀察中，發(fā)現(xiàn) QO-58lysine有一定抗癲癇和鎮(zhèn)痛作用

3、，現(xiàn)擬對QO-58lysine的鎮(zhèn)痛機制及作用的效果進行觀察，包括外周坐骨神經(jīng)損傷誘發(fā)病理性疼痛、三叉神經(jīng)痛和糖尿病神經(jīng)病理性疼痛，為進一步新藥開發(fā)提供依據(jù)。
　　目的：液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)測定QO-58lysine在大鼠DRG和TG神經(jīng)元中分布的濃度；膜片鉗技術(shù)分析QO-58lysine對DRG和TG神經(jīng)元M電流的影響；觀察藥物對神經(jīng)病理性疼痛動物模型的治療作用。
　　方法：
　　（1）100 mg/kg QO-58lysi

4、ne灌胃7天后，分離大鼠DRG和TG組織。液質(zhì)聯(lián)用測定組織中藥物濃度。
　?。?）原代培養(yǎng)SD大鼠的DRG和TG神經(jīng)元，采用全細胞膜片鉗方式，記錄中小直徑神經(jīng)元細胞的M電流。然后給予不同濃度的QO-58lysine溶液，觀察其對M電流的作用。
　?。?）通過 CCI手術(shù)建立外周神經(jīng)損傷致神經(jīng)病理性疼痛模型，25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg QO-58lysine重復(fù)給藥后測量機械刺激縮足閾值（MWT）和

5、熱刺激縮足潛伏期（TWL），評價其治療作用。
　?。?）通過ION-CCI手術(shù)建立三叉神經(jīng)痛模型，25 mg/kg、50 mg/kg QO-58lysine重復(fù)給藥后測量MWT，評價其治療作用。
　?。?）60 mg/kg腹腔注射2％STZ，建立STZ致糖尿病神經(jīng)病理性疼痛模型，12.5 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg QO-58lysine重復(fù)給藥后測量50%MWT，評價其治療作用。
　?。?）免疫組

6、化分析DRG和TG中KCNQ3蛋白的表達變化。
　　結(jié)果：
　?。?）DRG組織中QO-58lysine含量為13.16±7.76μg/mg；TG組織中QO-58lysine含量為8.89±1.48μg/mg。
　　（2）QO-58lysine可激活M通道。1、3、10、100μM QO-58lysine增大DRG神經(jīng)元M電流的倍數(shù)分別為0.43±0.03、0.65±0.11、1.59±0.63、2.17±0.14（n

7、=3-6），EC50為7.1μM。與給藥前相比，均具有顯著性差異。0.01、0.1、1、3、10、30、100μM QO-58lysine增大TG神經(jīng)元M電流的倍數(shù)分別為0.09±0.005、0.24±0.09、0.36±0.16、0.73±0.16、1.46±0.24、1.92±0.20、2.30±0.05（n=3-8），EC50為9.3±3.3μM。與給藥前相比，均具有顯著性差異。
　　（3）建立CCI模型，造模成功率為85%

8、，術(shù)后第8天灌胃給藥，測MWT和TWL。模型組在術(shù)后第13天MWT值和TWL值最低（分別為14.9±2.3 g；8.8±0.6 s）。陽性藥普瑞巴林PGB組在術(shù)后第13、15、17天，MWT值（分別為23.9±4.6 g、25.3±4.2 g、26.2±3.9 g）和TWL值（11.6±1.6 s、11.8±0.8 s、11.5±1.1 s）均有顯著提高。QO-58lysine25 mg/kg組在術(shù)后第13、15天MWT值分別為22±7

9、 g、24.4±4.5 g；術(shù)后第13、15、17天TWL值分別為10.9±1.6 s、10.7±1.2 s、10.5±1 s，與模型組相比均有顯著提高。QO-58lysine50 mg/kg組在術(shù)后第13天MWT值為19.8 g±4.9 g；第13、17天TWL值分別為9.7±1.1 s、10.1±1.3 s，與模型組相比均有顯著提高。QO-58lysine100 mg/kg組在術(shù)后第15天MWT值為24.2±3.7 g；第13、15

10、、17天TWL值分別為10.1±0.7 s、10.3±0.7 s、10.2±0.7 s，與模型組相比均有顯著提高。
　　（4）建立三叉神經(jīng)痛模型，術(shù)后第10天灌胃給藥。與模型組相比，在術(shù)后第14、17、21、28天，卡馬西平組MWT（分別為1.43±0.64 g、3.50±1.91 g、3.6±2.19 g、11.2±3.6 g），QO-58lysine25 mg/kg組MWT（分別為1.43±0.64 g、2.8±1.10 g、

11、2.16±1.07 g、7.33±2.3 g）， QO-58lysine50 mg/kg組MWT（分別為1.45±0.74 g、1.83±1.06 g、1.70±0.33 g、8.8±1.8 g）均有顯著提高。
　　（5）建立STZ致糖尿病神經(jīng)病理性疼痛模型，造模成功率為68%，造模后第22天灌胃給藥。STZ造模后第28、31天，與模型組50%MWT（分別為3.24±0.62 g、3.43±0.44 g）相比，陽性藥普瑞巴林PGB

12、組50%MWT（分別為13.72±4.92 g、11.54±3.82 g）、QO-58lysine12.5 mg/kg組50%MWT（分別為8.25±3.83 g、9.36±4.83 g）均有顯著提高。STZ造模后第28天，QO-58lysine25 mg/kg組50%MWT（8.05±4.76 g）有顯著提高。造模后第31天，QO-58lysine50 mg/kg組50%MWT（6.89±3.41 g）有顯著提高。
　　（6）免

13、疫組化結(jié)果顯示，KCNQ3蛋白在神經(jīng)元細胞膜上表達。直徑較大的神經(jīng)元上表達較少或不表達，中小直徑神經(jīng)元呈強表達。與對照組（平均光密度為0.180±0.04）相比，模型組的表達明顯降低（平均光密度為0.161±0.03）。與模型組相比，PGB組、QO-58lysine12.5 mg/kg和50 mg/kg組的表達增強（分別為0.216±0.01、0.188±0.01、0.184±0.005），有顯著性差異。
　　結(jié)論：灌胃給藥后，Q