NOD受體與TLR4在角膜細(xì)胞中的協(xié)同作用.pdf

1、研究背景：真菌性角膜潰瘍?yōu)槿蜃钪饕闹旅ば匝鄄?，高發(fā)于以農(nóng)業(yè)為主的發(fā)展中國家，我國是真菌性角膜潰瘍的高發(fā)地區(qū)，近幾年來真菌性角膜潰瘍的報(bào)道研究越來越多，相關(guān)的臨床流行病學(xué)調(diào)查顯示其發(fā)病率已上升到感染性角膜病的首位，因此，真菌性角膜潰瘍的防治課題已成為我國致盲性眼疾的重要臨床課題。
　　 通常情況下，真菌感染時(shí)很少侵犯正常角膜，但當(dāng)角膜上皮組織被破壞，角膜基質(zhì)層直接與真菌接觸時(shí)，真菌就能通過破損處破壞角膜上皮下層以及基質(zhì)層，導(dǎo)致

2、真菌性角膜潰瘍。因此，角膜上皮和基質(zhì)細(xì)胞在激活角膜的固有免疫反應(yīng)和抵抗真菌入侵中有重要作用。眾多研究已經(jīng)證明了TLR是人體固有免疫系統(tǒng)激活的關(guān)鍵因子，位于細(xì)胞膜的TLR識(shí)別來自細(xì)胞外部的病原體。但是病原微生體為了避免被識(shí)別，有其他侵入和通過上皮細(xì)胞層的方式，但是正常情況下真菌體內(nèi)的感染率并不高，這說明在避過TLR的識(shí)別后，機(jī)體一定還有其他的方式來識(shí)別入侵真菌。NOD受體蛋白家族能識(shí)別細(xì)胞內(nèi)的危險(xiǎn)信號(hào)，啟動(dòng)固有免疫系統(tǒng)，它代明了細(xì)胞內(nèi)同樣

3、有防御監(jiān)測(cè)手段。NOD受體是目前的研究熱點(diǎn)之一，但是關(guān)于它在角膜細(xì)胞中的表達(dá)，在抗真菌過程中的作用以及它與TLR的相互關(guān)系目前鮮有報(bào)道。
　　 目的：研究細(xì)胞內(nèi)模式識(shí)別受體核苷酸結(jié)合的寡聚結(jié)構(gòu)域NOD受體NOD1、NOD2在角膜細(xì)胞中的表達(dá)及其激活角膜細(xì)胞固有免疫過程中的作用，并探討它與Toll樣受體TLR4在此過程中的相互關(guān)系。
　　 方法：體外培養(yǎng)永生化人角膜上皮細(xì)胞(THCE)和永生化人角膜基質(zhì)細(xì)胞(THSF)，實(shí)

4、驗(yàn)細(xì)胞分為6組，分別更換DMEM培養(yǎng)液、LPS刺激液(1μg/ml)、DAP刺激液(10μg/ml)、MDP刺激液(10μg/ml)、LPS(1μg/ml)和DAP(10μg/ml)聯(lián)合刺激液、LPS(1μg/ml)和MDP(10μg/ml)聯(lián)合刺激液，于刺激后1h，3h，6h，12h，24h分別收取細(xì)胞上清以及細(xì)胞。用ELISA法測(cè)定上清中的TNF-α和IL-6的分泌，用實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)角膜細(xì)胞中NOD1、NOD2和TLR4的mR

5、NA表達(dá)，以及抗菌肽hBD2和LL37的mRNA的表達(dá)。應(yīng)用SPSS13.O統(tǒng)計(jì)分析軟件，數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組內(nèi)比較采用t檢驗(yàn)，各組間的比較采用方差分析，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：在相應(yīng)配體刺激下角膜細(xì)胞中NOD1、NOD2的表達(dá)呈時(shí)間依賴性上調(diào)，并能引起細(xì)胞培養(yǎng)物上清液中IL-6和TNF-a的分泌增多，以及抗菌肽LL37和hBD2的表達(dá)增加。聯(lián)合刺激組比單獨(dú)刺激組的表達(dá)量明顯增高，TLR4和NOD